p53のDNA結合ドメインのMDM2ユビキチン化信号は、カルシウムカルモジュリンキナーゼスーパーファミリーメンバーのドッキングサイトを形成します

遺伝的および生化学的研究では、p53のトランス活性化ドメインにおけるSer（20）リン酸化がp300触媒DNA依存性p53アセチル化とB細胞腫瘍抑制を媒介することが示されています。ただし、この修飾を媒介するプロテインキナーゼは十分に定義されていません。セル（20）リン酸化部位アッセイを使用して、CHK2、CHK1、DAPK-1、DAPK-3、DRAK-1、AMPKを含む広範なカルモジュリンキナーゼスーパーファミリーメンバーを識別しました（20）キナーゼ。これらのin vitroでのこれらの酵素によるSer（20）のp53トランス活性化ドメインフラグメントのリン酸化は、MDM2のユビキチンシグナルも存在するp53のボックスVドメインに由来するドッキング部位ペプチドによって媒介できます。in vivoの候補Ser（20）キナーゼとしてのこれらのカルシウムカルモジュリンキナーゼスーパーファミリーメンバーの評価により、Chk1またはDAPK-1のみがp53トランス活性化を刺激し、Ser（20）p53のリン酸化を誘導できることが示されています。CHK1をプロトタイプのin vivo Ser（20）キナーゼとして使用して、（I）小さな干渉RNAを使用したCHK1タンパク質の枯渇がSer（20）でp53リン酸化を減衰させることができることを示しています。v融合ペプチドは、ser（20）in vivoでのp53のリン酸化を減衰させる可能性があります。Ser（20）Chk1によるリン酸化へ。これらのデータは、p53のBox-Vモチーフがp53リン酸化またはユビキチン化のいずれかを媒介する酵素に結合する能力を発展させ、したがって、転写因子としてのp53の特定の活性を制御することを示しています。

Genetic and biochemical studies have shown that Ser(20) phosphorylation in the transactivation domain of p53 mediates p300-catalyzed DNA-dependent p53 acetylation and B-cell tumor suppression. However, the protein kinases that mediate this modification are not well defined. A cell-free Ser(20) phosphorylation site assay was used to identify a broad range of calcium calmodulin kinase superfamily members, including CHK2, CHK1, DAPK-1, DAPK-3, DRAK-1, and AMPK, as Ser(20) kinases. Phosphorylation of a p53 transactivation domain fragment at Ser(20) by these enzymes in vitro can be mediated in trans by a docking site peptide derived from the BOX-V domain of p53, which also harbors the ubiquitin signal for MDM2. Evaluation of these calcium calmodulin kinase superfamily members as candidate Ser(20) kinases in vivo has shown that only CHK1 or DAPK-1 can stimulate p53 transactivation and induce Ser(20) phosphorylation of p53. Using CHK1 as a prototypical in vivo Ser(20) kinase, we demonstrate that (i) CHK1 protein depletion using small interfering RNA can attenuate p53 phosphorylation at Ser(20), (ii) an enhanced green fluorescent protein (EGFP)-BOX-V fusion peptide can attenuate Ser(20) phosphorylation of p53 in vivo, (iii) the EGFP-BOX-V fusion peptide can selectively bind to CHK1 in vivo, and (iv) the Deltap53 spliced variant lacking the BOX-V motif is refractory to Ser(20) phosphorylation by CHK1. These data indicate that the BOX-V motif of p53 has evolved the capacity to bind to enzymes that mediate either p53 phosphorylation or ubiquitination, thus controlling the specific activity of p53 as a transcription factor.