オキシステロール結合タンパク質（OSBP）関連タンパク質4のステロール結合ドメインの特性評価は、ビメンチン組織における新しい役割を明らかにしています

オキシステロール結合タンパク質（OSBP）およびOSBP関連タンパク質4（ORP4; OSBP2およびHLMにも指定）は、タンパク質パートナーへの結合を介してステロール輸送および/または感知に関与しています。ORP4（ORP4S）のN末端走行型バリアントによるビメンチンの凝集は、フルレングスORP4Lではなく、この中間フィラメントとの機能的相互作用を示唆しました。ここでは、ビメンチンと相互作用するORP4ドメインを特定し、ステロールとOSBPがこの活性にどのように影響するかを決定します。CHO細胞では、糸状ビメンチンと共局在しているが、ビメンチンフィラメントの広範なリモデリングと共局在するOrp4Lは、オキシステロール結合ドメインに隣接するロイシンリピートモチーフ（アミノ酸361-382）の突然変異を必要としました。同様に、ORP4S 418-878にロイシン繰り返しが存在しないと、凝集したビメンチンフィラメントとの共局在が生じ、ステロール結合ドメインとロイシンの繰り返しが関与していることを示唆しています。OSBPロイシン繰り返し変異体の一時的な発現は、Orp4Lによるヘテロ二量体化を含むメカニズムによってビメンチン凝集を促進しました。in vitroで、グルタチオンS-トランスフェラーゼ（GST）-ORP4 380-878結合ビメンチン、コレステロール、25-ヒドロキシコレステロール。しかし、ステロール結合またはステロール結合を除去したという突然変異は、GST-ORP4とビメンチンの相互作用に影響を与えなかった。したがって、ORP4のステロール結合ドメインは、ビメンチン、コレステロール、オキシステロールに結合し、糸状ビメンチンネットワークと相互作用します。

Oxysterol-binding protein (OSBP) and OSBP-related protein 4 (ORP4; also designated OSBP2 and HLM) are implicated in sterol-transport and/or sensing via binding to protein partners. The aggregation of vimentin by an N-terminal-truncated variant of ORP4 (ORP4S), but not full-length ORP4L, suggested a functional interaction with this intermediate filament. Herein, we identify ORP4 domains that interact with vimentin, and determine how sterols and OSBP influence this activity. In CHO cells, ORP4L co-localized with filamentous vimentin but extensive remodeling of vimentin filaments required mutation of a leucine repeat motif (amino acids 361-382) adjacent to the oxysterol-binding domain. Similarly, the absence of the leucine repeat in ORP4S 418-878 resulted in co-localization with aggregated vimentin filaments, suggesting that both the sterol-binding domain and leucine repeat are involved. Transient expression of OSBP leucine repeat mutants also promoted vimentin aggregation by a mechanism involving heterodimerization with ORP4L. Glutathione S-transferase (GST)-ORP4 380-878 bound vimentin, cholesterol and 25-hydroxycholesterol in vitro. However, sterol-binding or a mutation that ablated sterol-binding did not influence the interaction of GST-ORP4 with vimentin. Thus the sterol-binding domain of ORP4 binds vimentin, cholesterol and oxysterols, and interacts with the filamentous vimentin network.