二光子蛍光寿命記録に適したCa2+指示薬色素の光物理的特性

我々は、定量的な二光子蛍光寿命イメージングに対するさまざまな Ca2+ 指示薬色素の適合性を分析しました。fura-2、fluo-3、BTC、およびカルセインは有用な Ca2+ 依存性寿命変化を示さなかったが、カルシウム オレンジ、カルシウム グリーン-1、オレゴン グリーン-2 および -5N、ならびにマグネシウム グリーンでは、二重指数関数寿命分析によって Ca2+ を含まない色素画分と Ca2+ 結合色素画分を定量することができました。後者の色素については、色素の不純物および Ca2+ 依存の吸光係数による寿命の歪みを補正する校正形式を導き出しました。

We analyzed the suitability of various Ca2+-indicator dyes for quantitative two-photon fluorescence-lifetime imaging. Although fura-2, fluo-3, BTC and calcein did not show useful Ca2+-dependent lifetime changes, calcium orange, calcium green-1, oregon green-2 and -5N, as well as magnesium green allowed to quantify the Ca2+-free and Ca2+-bound dye fractions by a double-exponential lifetime analysis. For the latter dyes, we derived calibration formalisms that correct for lifetime distortions by dye impurities and Ca2+-dependent extinction coefficients.