キレート剤のタンパク質への共役と、三価金属同位体との放射標識

ペプチドとタンパク質は、イメージングレポーターまたは他の用途に使用するために、金属要素でタグ付けされる場合があります。関心のあるポリペプチドは、最初に、対象の要素と安定した複合体を形成する適切なキレート剤に共役します。このコンジュゲーションステップは、基質の溶解度に応じて水性または非水性条件のいずれかで行われます。サイズが約10 kDaを超えるポリペプチドの場合、これは通常、水性媒体で行われます。最も一般的には、キレーターはリジンアミノ基と反応します。タンパク質は最初にpH 8-9で適切な緩衝液に脱着し、二機能性キレート剤のモル過剰が加えられます。適切なインキュベーション期間の後、過剰、反応性、または加水分解されたキレートレーターを除去し、タンパク質コンジュゲートを酸性緩衝液に分解します。コンジュゲートは、必要に応じて、未調整の金属を除去することにより、適切な金属塩を添加することでタグ付けできます。以下のプロトコルで説明されているように、共役、精製、標識手順全体には約2 dかかります。

Peptides and proteins may be tagged with metallic elements in order to use them as imaging reporters or for other applications. The polypeptide of interest is first conjugated to a suitable chelating agent that forms stable complexes with the element of interest. This conjugation step is undertaken either in aqueous or in non-aqueous conditions depending on the solubility of the substrate. For polypeptides of greater than approximately 10 kDa in size, this is normally done in aqueous medium. Most commonly the chelators are reacted with lysine amino groups. The protein is first desalted into a suitable buffer at pH 8-9 and a molar excess of a bifunctional chelating agent is added. After a suitable period of incubation, excess, unreacted or hydrolyzed chelator is removed and the protein conjugate is desalted into an acidic buffer. The conjugate can then be tagged by addition of a suitable metal salt followed, if necessary, by removal of unchelated metal. As described in the protocol that follows, the entire conjugation, purification and labeling procedure takes about 2 d.