チオシアネート - フェノール - クロロホルム抽出酸グアニジニウム酸によるRNA分離の単一段階方法：20年前

導入以来、「シングルステップ」方法は、異なるソースの生物学的サンプルから総RNAを分離するために広く使用されてきました。この方法の基礎にある原理は、チオシアン酸グアニジニウム、酢酸ナトリウム、フェノール、クロロホルムを含む酸性溶液による抽出後、RNAがDNAから分離され、その後に遠心分離が続くことです。酸性条件下では、総RNAは上部水相に残り、DNAとタンパク質のほとんどは間期または下部有機相のいずれかに残ります。その後、総RNAはイソプロパノールを使用した降水により回収され、いくつかの用途に使用できます。元のプロトコルは、4時間未満で細胞および組織からのRNAの分離を可能にし、植物モデルや動物モデル、および病理学的サンプルでの遺伝子発現の分析を大きく進めました。20年。

Since its introduction, the 'single-step' method has become widely used for isolating total RNA from biological samples of different sources. The principle at the basis of the method is that RNA is separated from DNA after extraction with an acidic solution containing guanidinium thiocyanate, sodium acetate, phenol and chloroform, followed by centrifugation. Under acidic conditions, total RNA remains in the upper aqueous phase, while most of DNA and proteins remain either in the interphase or in the lower organic phase. Total RNA is then recovered by precipitation with isopropanol and can be used for several applications. The original protocol, enabling the isolation of RNA from cells and tissues in less than 4 hours, greatly advanced the analysis of gene expression in plant and animal models as well as in pathological samples, as demonstrated by the overwhelming number of citations the paper gained over 20 years.