小さな干渉RNAによる単球由来の樹状細胞のCD83ノックダウンは、T細胞刺激の減少につながります

成熟したヒト樹状細胞（MDC）は、今日知られている最も強力なAPCであり、一次免疫応答を誘導するユニークな能力を持っています。MDCSの最もよく知られている表面マーカーの1つは、CD80やCD86などの共刺激分子とともに、成熟中に強く上方制御される糖タンパク質CD83です。Messenger RNAの輸出との干渉または特定のウイルスによる感染によりCD83表面発現が阻害された場合、DCSはT細胞増殖を誘導する能力が劇的に減少したことを示しました。ただし、これらの場合、他の細胞機能に対する副作用は完全に除外することはできません。この研究では、RNA干渉を使用することにより、CD83表面発現に特異的に影響を与える効率的な方法を提示します。CD83に対して標的とする小さな介入RNAを使用し、細胞に二重鎖を送達するためのエレクトロポレーションプロトコルを慎重に評価しました。さらに、新たに準備された未熟なDCSをCD83ノックダウンの適用に最適なターゲットとして特定し、この分子の長続きするサイレンシング効果を達成することもできました。最後に、CD83はT細胞の刺激中にエンハンサーとして機能し、DCを介したT細胞増殖を大幅に増加させ、T細胞プライミング中のサイトカイン発現の明確な変化と手をつないで行くことを確認することができました。これらの結果は、低M.W。阻害剤またはウイルス。したがって、この方法は、DC生物学に影響を与える適切な方法を提示します。

Mature human dendritic cells (mDCs) are the most powerful APCs known today, having the unique ability to induce primary immune responses. One of the best known surface markers for mDCs is the glycoprotein CD83, which is strongly up-regulated during maturation, together with costimulatory molecules such as CD80 and CD86. When CD83 surface expression was inhibited by interference with the messenger RNA export or by infection with certain viruses, DCs showed a dramatically reduced capability to induce T cell proliferation. However, in these cases side effects on other cellular functions cannot be excluded completely. In this study we present an efficient method to specifically influence CD83 surface expression by the use of RNA interference. We used small-interfering RNA targeted against CD83 and carefully evaluated an electroporation protocol for the delivery of the duplex into the cells. Furthermore, we identified freshly prepared immature DCs as the best target for the application of a CD83 knockdown and we were also able to achieve a long lasting silencing effect for this molecule. Finally, we were able to confirm that CD83 functions as an enhancer during the stimulation of T cells, significantly increases DC-mediated T cell proliferation, and goes hand in hand with clear changes in cytokine expression during T cell priming. These results were obtained for the first time without the use of agents that might cause unwanted side effects, such as low m.w. inhibitors or viruses. Therefore, this method presents a suitable way to influence DC biology.