コックス酵素の阻害を測定するためのELISAメソッド

シクロオキシゲナーゼ（COX）反応は、酸素消費、ペルオキシダーゼの共層酸化、またはプロスタグランジン（PG）検出の測定により監視できます。このプロトコルは、潜在的な阻害剤の存在下または非存在下で、アラキドン酸の酵素変換によって産生されるPGE2を定量化することにより、シクロオキシゲナーゼ活性を測定する手順を説明します。このハイスループット法には、シクロオキシゲナーゼ活性を直接測定し、酵素はほとんど必要としないという利点があります。アッセイの最初の部分は、アラキドン酸、シクロオキシゲナーゼ、および試験サンプルをインキュベートしてプロスタグランジンを生成することで構成されています。2番目の部分は、ELISAメソッドを使用して、酵素反応によって生成されるPGE2の量を定量化します。COX-1およびCOX-2酵素の分離も説明されています。このプロトコルは、16時間および4時間のインキュベーション相を含む約23時間で完了できます。これには、酵素製剤（COX-1で3時間、COX-2で24時間）またはELISAプレートの調製（23時間、インキュベーションを含む）は含まれません。

The cyclooxygenase (COX) reaction can be monitored by measurement of oxygen consumption, peroxidase co-substrate oxidation or prostaglandin (PG) detection. This protocol describes a procedure measuring cyclooxygenase activity by quantifying PGE2 produced by enzymatic conversion of arachidonic acid, in the presence or absence of potential inhibitors. This high-throughput method has the advantage that it directly measures cyclooxygenase activity and requires little enzyme. The first part of the assay consists of incubating arachidonic acid, cyclooxygenase and the test samples to generate prostaglandins. The second part uses an ELISA method to quantify the amount of PGE2 produced by the enzymatic reaction. The isolation of COX-1 and COX-2 enzymes is also described. This protocol can be completed in approximately 23 h, including 16-h and 4-h incubation phases. This does not include enzyme preparation (3 h for COX-1 and 24 h for COX-2) or preparation of ELISA plates (23 h, including incubation).