ターゲットmRNAは、3 'UTRのように5' UTRのマイクロRNA結合部位によって効率的に抑制されます

動物では、マイクロRNA（miRNA）は、標的mRNAの3 'UTRに結合し、翻訳に干渉しますが、タンパク質合成の阻害の正確なメカニズムは不明のままです。コーディング領域または内因性mRNAの5 'UTRの機能的なmiRNA結合部位は特定されていません。内部リボソーム侵入部位（IRESS）を含むルシフェラーゼレポーターmRNAの5 'UTRにmiRNA標的部位を導入する効果を研究したため、ミクロリボヌクレタンパク質複合体による潜在的な立体障害は翻訳の開始を妨げません。内因性LET-7A miRNAを発現するヒトHELA細胞では、これらのIREを含む記者の翻訳効率は、Caenorhabditis elegans Lin-41 3 'UTRの5' let-7の相補部位を持つ翻訳効率を抑制しました。同様に、IRESを含む記者は、Human Ago2が5 'または3' UTRにつながれたときに翻訳的に抑制されました。興味深いことに、DNAトランスフェクションの方法は、miRNAを介した抑制を観察する我々の能力に影響を与えました。我々の結果は、標的mRNA上のあらゆる位置との関連が、ミクロリボヌクレタンパク質が開始のある段階で翻訳の抑制を行使するのに機械的に十分であることを示唆しています。

In animals, microRNAs (miRNAs) bind to the 3' UTRs of their target mRNAs and interfere with translation, although the exact mechanism of inhibition of protein synthesis remains unclear. Functional miRNA-binding sites in the coding regions or 5' UTRs of endogenous mRNAs have not been identified. We studied the effect of introducing miRNA target sites into the 5' UTR of luciferase reporter mRNAs containing internal ribosome entry sites (IRESs), so that potential steric hindrance by a microribonucleoprotein complex would not interfere with the initiation of translation. In human HeLa cells, which express endogenous let-7a miRNA, the translational efficiency of these IRES-containing reporters with 5' let-7 complementary sites from the Caenorhabditis elegans lin-41 3' UTR was repressed. Similarly, the IRES-containing reporters were translationally repressed when human Ago2 was tethered to either the 5' or 3' UTR. Interestingly, the method of DNA transfection affected our ability to observe miRNA-mediated repression. Our results suggest that association with any position on a target mRNA is mechanistically sufficient for a microribonucleoprotein to exert repression of translation at some step downstream of initiation.