タンパク質電気泳動の読み出しツールとしての電気化学顕微鏡をスキャン

走査型電気化学顕微鏡（SECM）を使用して、ポリ（ビニリデン拡散）膜上の銀染色タンパク質を画像化しました。この方法は、フィードバックモードのスキャン微小電極で電流を測定することに基づいています。電気化学的フィードバックは、染色プロセス中に形成された分離された5〜10 nm直径の銀ナノ粒子のレドックス媒介エッチングによって引き起こされます。レドックスメディエーターや染色プロトコルなどのいくつかのパラメーターが最適化され、高解像度と低い検出限界、つまり0.5 ngのウシ血清アルブミン（4 x 10（-14）mol）の領域に分布しています。mm（2）（4 x 10（-16）mol x cm（-2））。ゲル電気泳動後のタンパク質を検出するためにSECMを敏感で定量的な読み出し方法として使用できることを実証するために、ゲル電気泳動分離と電気ブロッティング後のベータラクトグロブリンAおよびミオグロビン帯の画像が得られました。さらに利点は、銀染色を除去し、さらに下流の質量分析分析を可能にすることです。

Scanning electrochemical microscopy (SECM) was used to image silver-stained proteins on a poly(vinylidene difluoride) membrane. The method is based on measuring the current at a scanning microelectrode in the feedback mode. The electrochemical feedback is caused by the redox-mediated etching of the isolated 5 - 10-nm-diameter silver nanoparticles formed during the staining process. Several parameters, such as the redox mediator and the staining protocol, were optimized to ensure a high resolution and a low detection limit, i.e., 0.5 ng of bovine serum albumin (4 x 10(-14) mol) distributed on an area of 1 mm(2) (4 x 10(-16) mol x cm(-2)). Images of beta-lactoglobulin A and myoglobin bands after gel electrophoretic separation and electroblotting were obtained in order to demonstrate that SECM can be employed as a sensitive and quantitative readout method for detection of proteins after gel electrophoresis. An additional advantage is that the silver staining can be removed, allowing further downstream mass spectrometry analysis.