HPLC-MS/MS分析前のオフラインホスホペプチドクロマトグラフィーの化学療法親和性固相としての二酸化チタン

オンラインナノエレクトロスプレーイオン化タンデム質量分析によるその後の分析と直接互換性のあるリン酸化ペプチドの選択的濃縮のための新しいオフラインクロマトグラフィーアプローチを開発しました。この手法では、二酸化チタン（TIO2）パッキングピペットチップは、2次元クロマトグラフィーシステムのオフライン第一次元分離ステップとして機能するホスホペプチドトラップとして使用されます。これに続いて、オンラインのナノ逆相高性能液体クロマトグラフィーが続きます。ここでは、TiO2で満たされたヒントからのサンプルの荷重、洗浄、溶出という各ステップに個別に最適化された、濃縮に適した方法を提示します。TiO2カラムのトラッピング選択性を高めるために、2,5-ジヒドロキシベンゾ酸と組み合わせた1-オクタンスルホン酸のナトリウム塩をイオン - ペプリング剤として、酸性ペプチドの避妊薬を使用しました。これらの薬剤はまた、リン酸化ペプチドの結合を改善し、非リン酸化されたものの結合をブロックします。この濃縮手順には30分かかり、その後、洗浄や溶出勾配を含む100分のHPLCプログラムが続きます。

We have developed a new offline chromatographic approach for the selective enrichment of phosphorylated peptides that is directly compatible with subsequent analysis by online nano electrospray ionization tandem mass spectrometry. In this technique, a titanium dioxide (TiO2)-packed pipette tip is used as a phosphopeptide trap that acts as an offline first-dimension separation step in a two-dimensional chromatography system. This is followed by online nano reversed-phase high-performance liquid chromatography. Here, we present suitable methods for enrichment, optimized separately for each step: sample loading, washing and elution from the TiO2-filled tips. To increase the trapping selectivity of the TiO2 column, we used the sodium salt of 1-octanesulfonic acid combined with 2,5-dihydroxybenzoic acid as ion-pairing agents and displacers for acidic peptides. These agents also improve the binding of phosphorylated peptides and block the binding of non-phosphorylated ones. This enrichment procedure takes 30 min, followed by a 100-min HPLC program, including washing and an elution gradient.