ゼブラフィッシュにおける炎症およびマイコバクテリア肉芽腫の形成に関与するMYC発現好中球集団の同定とリアルタイムイメージング

エンハンサートラップスクリーニングにより、胚後期および初期幼虫の発達中の白血球特異的YFP発現を示すトランスジェニックゼブラフィッシュラインを特定しました。そのエンハンサー検出挿入は、MYC Proto-Onceeneファミリーの新規メンバーの近くでマッピングされ、ヒト骨髄術の調節に重要であることが知られている転写因子をコードしました。ゼブラフィッシュMYCファミリーの特性評価は、この特定のMYC遺伝子のみが白血球で強く発現することを示しました。MYC/YFP発現細胞タイプを特定するために、多重蛍光in situハイブリダイゼーションにより、記載された骨髄性マーカーの特異性を再検討し、LCP1は一般的な白血球マーカー、CSF1Rはマクロファージ固有のマーカーと見なすことができることを示しています。好中球特異的マーカーとしてのLyz。その後の共局在分析は、YFP陽性細胞を好中球集団のサブセットとして定義しました。リアルタイムの共焦点イメージングを使用して、これらの細胞が炎症の部位に移動し、マリナム誘発性肉芽腫形成を含む感染に対する自然免疫応答に関与していることを実証します。

By enhancer trap screening we identified a transgenic zebrafish line showing leukocyte-specific YFP expression during late embryo and early larval development. Its enhancer detection insertion was mapped near a novel member of the myc proto-oncogene family, encoding transcription factors known to be important for regulating human myelopoiesis. Characterization of the zebrafish myc family showed that only this particular myc gene is strongly expressed in leukocytes. To identify the myc/YFP-expressing cell type, we re-examined specificity of described myeloid markers by multiplex fluorescent in situ hybridization, showing that lcp1 can be considered as a general leukocyte marker, csf1r as a macrophage-specific marker, and mpx and lyz as neutrophil-specific markers. Subsequent colocalization analysis defined the YFP-positive cells as a subset of the neutrophil population. Using real-time confocal imaging we demonstrate that these cells migrate to sites of inflammation and are involved in innate immune responses towards infections, including Mycobacterium marinum-induced granuloma formation.