コラーゲンII型ネオエピトープペプチドの定量化のための免疫親和性LC-MS/MSアッセイの臨床検証：ヒト尿中のマトリックスメタロプロテイナーゼ活性と変形性関節症のバイオマーカー

II型コラーゲンの分解は、変形性関節症（OA）の病理と関連しています。マトリックスメタロプロテイナーゼ（MMP）は、コラーゲンの分解を触媒する原因となる酵素であり、したがって、OAの治療の潜在的な標的として追求されます。in vivo MMP活性の反映として特定されたコラーゲン由来のペプチドは、MMP活性の標的バイオマーカー、およびOA疾患状態および/または進行の潜在的なバイオマーカーとして調査されています。最も豊富な尿型IIコラーゲンネオエピトープ（UTIINE）ペプチドの定量化のために開発された免疫親和性液体液体クロマトグラフィー - テンデム質量分析（LC-MS/MS）アッセイ。触媒分解は、臨床使用のために検証されました。検証実験は、内因性分析物の定量化に関連する特定の課題に注意を払って設計されました。検証済みの方法は、0.156-7.50 ng/mlの線形範囲にわたって、敏感で、選択的、正確（<15％の相対誤差）および正確な（<15％の変動係数）です。サンプルの安定性と被験者間およびおよび吸引局面内の変動は、正常およびOA集団の尿で評価されました。この方法は、OAの潜在的なバイオマーカーとしてUTIINEの有用性を調査する臨床研究のヒト尿サンプルを分析するために適用されました。

The degradation of type II collagen has been associated with the pathology of osteoarthritis (OA). Matrix metalloproteinases (MMPs) are enzymes that are responsible for catalyzing the degradation of collagen and, therefore, are pursued as potential targets for the treatment of OA. Collagen-derived peptides identified as a reflection of in vivo MMP activity have been investigated as target biomarkers of MMP activity as well as potential biomarkers of OA disease state and/or progression. An immunoaffinity liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) assay developed for the quantification of the most abundant urinary type II collagen neoepitope (uTIINE) peptide, a 45-mer with 5 HO-proline residues resulting from MMP-13-catalyzed degradation, was validated for clinical use. Validation experiments were designed with attention to specific challenges related to quantification of endogenous analytes. The validated method is sensitive, selective, accurate (<15% relative error) and precise (<15% coefficient of variation) over a linear range of 0.156-7.50 ng/ml. Sample stability and inter- and intrasubject variability were evaluated in the urine of normal and OA populations. The method was applied to analyze human urine samples from clinical studies investigating the utility of uTIINE as a potential biomarker for OA.