p75（NTR）を結合する環状ペプチドは、ニューロンをベータアミロイド（1-40）誘発細胞死から保護します

現在の研究では、ベータアミロイド（ABETA）（1-40）による死亡から細胞を救助するP75（NTR）拮抗的な環状ペプチドの能力を決定しました。P75（NTR） - 、P140（TRKA）-NIH-3T3細胞またはE17胎児ラット皮質ニューロンを125i ngfまたは125i-abeta（1-40）および環状ペプチドの濃度の増加（Catdikgaec）とインキュベートしました。125i-ngfまたは125i-abeta（1-40）の結合を置換するペプチド能力が決定されました。重複した培養物を、catdikgaec（250 nm）または希釈剤でプレインキュベートし、Abeta（1-40）で刺激しました。アベタ（1-40）結合を置き換えるペプチド能力、アベタ（1-40）誘発性シグナル伝達および救助細胞をABETAを介した毒性から干渉し、免疫沈降およびオートラジオグラフィー、北部ブロッティング、JNK活性化、MTT、トリパンブルーアッセイによって決定されました。ペプチドは、P75（NTR）に結合するNGFおよびABETA（1-40）を阻害しましたが、P140（TRKA）には結合しませんでした。ABETA（1-40）は、希釈剤処理P75（NTR）細胞にC-Jun転写（57.3％+/- 0.07％）を誘導しましたが、環状ペプチドとプレインキュベートした細胞では誘導されませんでした。また、250 nmで、ペプチドはJNKのABETA（1-40）誘発性リン酸化を71.8％+/- 0.03％減少させ、次のようにアベタ誘発性毒性に対して保護されたニューロンを保護しました：トリパンブルー除外アッセイ（53％+/--希釈液前処理培養中の11％トリパン青陽性細胞対環状ペプチド前培養培養で28％+/- 5％）;MTTアッセイ（0.09 +/- 0.03単位希釈術前細胞と0.12 +/- 0.004ユニットの環状ペプチド前処理細胞の単位）;代表的な顕微鏡フィールドの視覚化。我々のデータは、P75（NTR）への結合を媒介することが知られているNGFのアミノ酸28-36に相同な環状ペプチドが、ABETA（1-40）のニューロン（1-40）によるニューロン（1-40）誘発毒性を妨害する可能性があることを示唆しています。

The current study determined the ability of a p75(NTR) antagonistic cyclic peptide to rescue cells from beta amyloid (Abeta) (1-40)-induced death. p75(NTR)-, p140(trkA)-NIH-3T3 cells or E17 foetal rat cortical neurones were incubated with 125I-NGF or 125I-Abeta (1-40) and increasing concentrations of the cyclic peptide (CATDIKGAEC). Peptide ability to displace 125I-NGF or 125I-Abeta (1-40) binding was determined. Duplicate cultures were preincubated with CATDIKGAEC (250 nM) or diluent and then stimulated with Abeta (1-40). Peptide ability to displace Abeta (1-40) binding, interfere with Abeta (1-40)-induced signalling and rescue cells from Abeta-mediated toxicity was determined by immunoprecipitation and autoradiography, Northern blotting, JNK activation, MTT and trypan blue assays. The peptide inhibited NGF and Abeta (1-40) binding to p75(NTR), but not to p140(trkA). Abeta (1-40) induced c-jun transcription (57.3% +/- 0.07%) in diluent-treated p75(NTR)-cells, but not in cells preincubated with the cyclic peptide. Also, at 250 nM, the peptide reduced Abeta (1-40)-induced phosphorylation of JNK by 71.8% +/- 0.03% and protected neurones against Abeta-induced toxicity as determined by: trypan blue exclusion assay (53% +/- 11% trypan blue-positive cells in diluent pretreated cultures vs. 28% +/- 5% in cyclic peptide-pretreated cultures); MTT assay (0.09 +/-0.03 units in diluent-pretreated cells vs. 0.12 +/- 0.004 units in cyclic peptide-pretreated cells); and visualization of representative microscopic fields. Our data suggest that a cyclic peptide homologous to amino acids 28-36 of NGF known to mediate binding to p75(NTR) can interfere with Abeta (1-40) signalling and rescue neurones from Abeta (1-40)-induced toxicity.