Saccharomyces cerevisiaeからの複数のプラスミドの回復と識別のための新しい酵母シャトルベクターのシリーズ

Saccharomyces cerevisiae酵母株を複数の補助栄養マーカーを備えた酵母株の入手可能性により、耳酸素栄養マーカーを補完するマーカー遺伝子を含む複数の酵母シャトルベクターを安定させ、選択することができます。特定の実験的状況では、酵母から複数のシャトルベクターを回復する必要があります。S. cerevisiaeからの複数のプラスミドの回復と同定を促進するために、酵母シャトルベクターのPRSシリーズに基づいて一連のプラスミドを構築しました。クロラムフェニコール、カナマイシン、ゼオシンに対する細菌抗生物質耐性遺伝子は、酵母セントロメア配列（CEN6）、自律的に複製された配列（ARSH4）、および4つの酵母選択可能なマーカー遺伝子の1つと組み合わされています（His3、Trp1、Leu2またはURA3）。一連のベクトル。産生された12のプラスミドは、多目的プラスミドPbluescript IIの骨格内の抗生物質耐性と酵母マーカー遺伝子が異なります。新しく構築されたベクトルは、元のPRSベクターと同様の有糸分裂安定性を示しています。酵母シャトルベクターのアンピシリン耐性PRSシリーズシリーズと組み合わせて、これらのプラスミドは現在、S。cerevisiaeの最大4つの異なるベクターの細菌の回復と識別を可能にします。

The availability of Saccharomyces cerevisiae yeast strains with multiple auxotrophic markers allows the stable introduction and selection of more than one yeast shuttle vector containing marker genes that complement the auxotrophic markers. In certain experimental situations there is a need to recover more than one shuttle vector from yeast. To facilitate the recovery and identification of multiple plasmids from S. cerevisiae, we have constructed a series of plasmids based on the pRS series of yeast shuttle vectors. Bacterial antibiotic resistance genes to chloramphenicol, kanamycin and zeocin have been combined with the yeast centromere sequence (CEN6), the autonomously replicating sequence (ARSH4) and one of the four yeast selectable marker genes (HIS3, TRP1, LEU2 or URA3) from the pRS series of vectors. The 12 plasmids produced differ in antibiotic resistance and yeast marker gene within the backbone of the multipurpose plasmid pBluescript II. The newly constructed vectors show similar mitotic stability to the original pRS vectors. In combination with the ampicillin-resistant pRS series of yeast shuttle vectors, these plasmids now allow the recovery and identification in bacteria of up to four different vectors from S. cerevisiae.