ヒトビリバーディン還元酵素によるTNF-α活性化PKC-ZETAシグナル伝達の調節：還元酵素の活性化および阻害ドメインの同定

ヒトビリバーディンレダクターゼ（HBVR）はデュアル機能酵素です。ビリルビン形成と、活性化因子をプロテインキナーゼC（PKC）ゼータ、シトカイン、インスリン、インスリン、酸素種（ROS）（ROS）と共有するS/T/Yキナーゼの触媒です。。現在、HBVRがPKC-ZETAの自己リン酸化、TNF-αによる刺激、およびNF-Kappab DNA結合およびプロモーター活性のサイトカイン刺激を増加させることを示しています。HBVR S/TキナーゼドメインのS149およびシグナル伝達タンパク質のSH2ドメインのHBVRのドッキング部位のYLS230FのS230は、PKC-ZETAのリン酸化標的です。2つのHBVRベースのペプチド、Krnryls230F（＃1）およびKKRILHC281（＃2）は、それぞれS-> AまたはC-> A誘導体ではなく、TNF-Alphaおよびその膜翻訳によるPKC-ZETA刺激をブロックしました。C末端ベースのペプチドKYCCSRK296（＃3）、TNF-ALPHAによるPKC-ZETA刺激の強化。このため、Lys296が不可欠でした。代謝的に32p標識HEK293細胞では、HBVRまたはPKC-ZETAをトランスフェクトしたため、TNF-alphaはHBVRリン酸化を増加させました。TNF-alphaは、ヌクレオチド結合ループ（G17）、S149、またはS230のポイント変異を伴うHBVRの小さな干渉RNAに感染した細胞のPKC-ZETAを刺激しませんでした。これは、「キナーゼ-Dead」PKC-ZETA（K281R）の応答に似ていました。ペプチド＃1は、PKC-ZETA-docking部位の相互作用をブロックし、ペプチド＃2がPKC-ZETA C1ドメインの機能を破壊し、ペプチド＃3がキナーゼへのATPプレゼンテーションを変えることをお勧めします。調査結果は、PKC-ZETA活性のモジュレーターの開発とサイトカインに対する細胞反応の潜在的な重要性です。

Human biliverdin reductase (hBVR) is a dual function enzyme: a catalyst for bilirubin formation and a S/T/Y kinase that shares activators with protein kinase C (PKC) -zeta, including cytokines, insulin, and reactive oxygen species (ROS). Presently, we show that hBVR increases PKC-zeta autophosphorylation, stimulation by TNF-alpha, as well as cytokine stimulation of NF-kappaB DNA binding and promoter activity. S149 in hBVR S/T kinase domain and S230 in YLS230F in hBVR's docking site for the SH2 domain of signaling proteins are phosphorylation targets of PKC-zeta. Two hBVR-based peptides, KRNRYLS230F (#1) and KKRILHC281 (#2), but not their S-->A or C-->A derivatives, respectively, blocked PKC-zeta stimulation by TNF-alpha and its membrane translocation. The C-terminal-based peptide KYCCSRK296 (#3), enhanced PKC-zeta stimulation by TNF-alpha; for this, Lys296 was essential. In metabolically 32P-labeled HEK293 cells transfected with hBVR or PKC-zeta, TNF-alpha increased hBVR phosphorylation. TNF-alpha did not stimulate PKC-zeta in cells infected with small interfering RNA for hBVR or transfected with hBVR with a point mutation in the nucleotide-binding loop (G17), S149, or S230; this was similar to the response of "kinase-dead" PKC-zeta(K281R). We suggest peptide #1 blocks PKC-zeta-docking site interaction, peptide #2 disrupts function of the PKC-zeta C1 domain, and peptide #3 alters ATP presentation to the kinase. The findings are of potential significance for development of modulators of PKC-zeta activity and cellular response to cytokines.