アストロウイルス構造タンパク質VP90と膜との関連は、ウイルスの形態形成において役割を果たします

ヒトアストロウイルスYUC8のカプシドポリタンパク質前駆体であるVP90はウイルス粒子に組み立てられ、vP70を生成するために細胞カスパーゼによるカルボキシ末端での処理はウイルスの細胞放出と相関しています。ここでは、これらのタンパク質の特性とそれらの細胞内分布に対するVP90-VP70処理の効果を特徴づけました。VP90は、膜濃縮画分（MVP90）およびサイトゾルタンパク質（CVP90）で豊富な画分（CVP90）で発見されましたが、VP70は後者の画分でのみ発見されました。トリプシンの活性化により、すべてのVP90含有画分で感染性が検出され、MVP90とCVP90の両方が粒子に組み立てることができることが確認されました。ただし、VP90の2つの形態は、特にカルボキシ末端でトリプシンと異なる感度を示しました。これは、MVP90の場合、プロテアーゼ消化後に膜関連のままであることが示されました。構造タンパク質オリゴマーは、精製されたVP70含有ウイルス、および膜濃縮画分で検出されましたが、細胞質画分ではあまり明らかではありませんでした。感染した細胞の超微細構造研究により、さまざまな種類のウイルス粒子が明らかになり、その一部は膜に関連しているように見えました。免疫電子顕微鏡により、構造タンパク質はクラスター内のウイルス粒子を形成し、感染中に誘導される小胞の端に関連することが示されました。CVP90ではなく、MVP90と共局在した非構造タンパク質とウイルスRNAは、MVP90が最初に粒子に組み立てられたタンパク質の形を、ウイルスゲノムが複製されている部位で表す可能性があることを示唆しています。

VP90, the capsid polyprotein precursor of human astrovirus Yuc8, is assembled into viral particles, and its processing at the carboxy terminus by cellular caspases, to yield VP70, has been correlated with the cell release of the virus. Here, we characterized the effect of the VP90-VP70 processing on the properties of these proteins, as well as on their intracellular distribution. VP90 was found in membrane-enriched fractions (mVP90), as well as in fractions enriched in cytosolic proteins (cVP90), while VP70 was found exclusively in the latter fractions. Upon trypsin activation, infectivity was detected in all VP90-containing fractions, confirming that both mVP90 and cVP90 are able to assemble into particles; however, the two forms of VP90 showed differential sensitivities to trypsin, especially at their carboxy termini, which in the case of mVP90 was shown to remain membrane associated after protease digestion. Structural protein oligomers were detected in purified VP70-containing viruses, as well as in membrane-enriched fractions, but they were less evident in cytosolic fractions. Ultrastructural studies of infected cells revealed different types of viral particles, some of which appeared to be associated with membranes. By immunoelectron microscopy, structural proteins were shown to form virus particles in clusters and to associate with the edges of vesicles induced during infection, which also appear to contain subviral particles inside. Nonstructural proteins and viral RNA colocalized with mVP90, but not with cVP90, suggesting that mVP90 might represent the form of the protein that is initially assembled into particles, at the sites where the virus genome is being replicated.