Dynabeadsを使用した細胞の分離と拡張

この章では、細胞の分離と拡張のためのDynabeadsの使用について説明します。Dynabeadsは、磁気的かつ超常磁性にされた均一なポリスチレン球状ビーズです。つまり、磁場でのみ磁気です。この特性により、磁場が除去されるとビーズは簡単に再懸濁できます。ジョン・ウゲルスタッド教授によって作られたダイナビーズの発明は、多くの生物学的材料の分離に革命をもたらしました。たとえば、ビーズの表面への標的特異的抗体の付着により、血液などの複雑な懸濁液から無傷の細胞を直接捕捉して分離することができます。これはすべて、カラム分離技術や遠心分離を必要とせずに、単純な磁場の影響下で達成されます。一般に、特定の抗体でコーティングされた磁気ビーズは、さまざまな細胞タイプの分離または枯渇のいずれかに使用できます。開始サンプル、細胞表面マーカー、および問題の下流のアプリケーションの性質に応じて、正または負の細胞の分離を実行できます。陽性細胞の分離は、全血などの未加工のサンプルや下流の分子用途に最適な方法です。陽性細胞の分離は、ビーズの剥離と除去後の下流のアプリケーションにも使用できます。負の細胞隔離は、目的の細胞が触れられないままであることが重要である場合、選択する方法です。一部の細胞集団は、複数の細胞表面マーカーによってのみ定義できます。このような細胞の集団は、陰性細胞分離と陽性細胞の分離の組み合わせによって分離できます。細胞表面活性化分子に向けられた抗体とDynabeadを結合することにより、ビーズは細胞の分離と拡大の両方に使用できます。Dynabeadsは現在、2つの主要な臨床応用で使用されています。1）dynabeads clinexvivo CD3/CD28を使用したEx vivo T細胞分離および拡張のためのCD34幹細胞分離のためのIsoLEX 300I磁気細胞選択システムで使用されています。。

This chapter describes the use of Dynabeads for cell isolation and expansion. Dynabeads are uniform polystyrene spherical beads that have been made magnetisable and superparamagnetic, meaning they are only magnetic in a magnetic field. Due to this property, the beads can easily be resuspended when the magnetic field is removed. The invention of Dynabeads made, by Professor John Ugelstad, has revolutionized the separation of many biological materials. For example, the attachment of target-specific antibodies to the surface of the beads allows capture and isolation of intact cells directly from a complex suspension such as blood. This is all accomplished under the influence of a simple magnetic field without the need for column separation techniques or centrifugation. In general, magnetic beads coated with specific antibodies can be used either for isolation or depletion of various cell types. Positive or negative cell isolation can be performed depending on the nature of the starting sample, the cell surface markers and the downstream application in question. Positive cell isolation is the method of choice for unprocessed samples, such as whole blood, and for downstream molecular applications. Positive cell isolation can also be used for any downstream application after detachment and removal of the beads. Negative cell isolation is the method of choice when it is critical that cells of interest remain untouched, i.e., no antibodies have been bound to any cell surface markers on the cells of interest. Some cell populations can only be defined by multiple cell surface markers. Such populations of cells can be isolated by the combination of negative and positive cell isolation. By coupling Dynabeads with antibodies directed against cell surface activation molecules, the beads can be used both for isolation and expansion of the cells. Dynabeads are currently used in two major clinical applications: 1) In the Isolex 300i Magnetic Cell Selection System for CD34 Stem Cell Isolation--2) For ex vivo T cell isolation and expansion using Dynabeads ClinExVivo CD3/CD28 for clinical trials in novel adoptive immunotherapy.