シナプス複合体形成に関与するTN5トランスポソーゼ残基の部位指向変異誘発研究

転位（ゲノムDNAの再配置をもたらすDNAの離散セグメントの動き）は、トランスポサゼがトランスポゾンDNA END配列と二量体DNAタンパク質シナプス複合体を形成すると開始されます。シナプス複合体は、転置プロセス中に発生する触媒反応の前提条件です。シナプス複合体に関与するトランスポサゼ-DNA相互作用は非常に興味深いものです。ここでは、TN5システムのシナプスにつながるタンパク質DNA相互作用を検証するための研究を実施しました。具体的には、（I）Arg342、Glu344、およびASN348および（II）Ser438、Lys439、およびSer445を研究しました。それぞれトランスポゾンエンドシーケンスDNA。遺伝的および生化学的アッセイを使用することにより、1を除くすべての場合において、これらの残基のそれぞれが、共結晶構造によって予測されるように、シナプス複合体形成に重要な役割を果たすことを示しました。

Transposition (the movement of discrete segments of DNA, resulting in rearrangement of genomic DNA) initiates when transposase forms a dimeric DNA-protein synaptic complex with transposon DNA end sequences. The synaptic complex is a prerequisite for catalytic reactions that occur during the transposition process. The transposase-DNA interactions involved in the synaptic complex have been of great interest. Here we undertook a study to verify the protein-DNA interactions that lead to synapsis in the Tn5 system. Specifically, we studied (i) Arg342, Glu344, and Asn348 and (ii) Ser438, Lys439, and Ser445, which, based on the previously published cocrystal structure of Tn5 transposase bound to a precleaved transposon end sequence, make cis and trans contacts with transposon end sequence DNA, respectively. By using genetic and biochemical assays, we showed that in all cases except one, each of these residues plays an important role in synaptic complex formation, as predicted by the cocrystal structure.