海洋細菌によって生成されたベータガラクトシドアルファ2,6-シアリルトランスフェラーゼ、フォトバクテリウムleiognathi JT-shiz-145は、pH 8で活動しています

フォトバクテリウムleiognathi JT-shiz-145によって生成されたシアリルトランスフェラーゼをコードする遺伝子を、大腸菌でクローン化、配列決定、および発現しました。シアリルトランスフェラーゼ遺伝子には、497アミノ酸残基の予測タンパク質をコードする1494塩基対（BP）のオープンリーディングフレームが含まれていました。シアリルトランスフェラーゼの推定されたアミノ酸配列は、哺乳類のシアリルトランスフェラーゼと有意な類似性を持たず、シアリルモチーフを含んでいませんでしたが、P。ダムセラエJT0160によって生成されたベータガラクトシドアルファ2,6-シアリルトランスフェラーゼであるベータガラクトシドアルファ2,6-シアリルトランスフェラーゼと高い相同性を示しました。新しい酵素のアクセプター基質特異性は、P。damselaeJT0160のalpha2,6-sialyltransferaseのそれと類似していましたが、その活性はpH 8で最大でした。、酸性pHで最大活性を持っています。一般に、シアリルトランスフェラーゼの一般的なドナー基質であるシアルシドとシチジン-5'-モノホスホ-N-アセチルネルアミン酸の両方が、基本条件下でより安定しています。したがって、基本範囲に最適なpHを備えたシアリルトランスフェラーゼは、シアロシドの調製と、アシアログリコタンパク質やアシアログリコリピッドなどのグリコココニューゲートの修飾に役立つはずです。したがって、P。leiognathiJT-Shiz-145から得られたシアリルトランスフェラーゼは、シアロシドの効率的な産生のための有望なツールです。

A gene encoding a sialyltransferase produced by Photobacterium leiognathi JT-SHIZ-145 was cloned, sequenced, and expressed in Escherichia coli. The sialyltransferase gene contained an open reading frame of 1494 base pairs (bp) encoding a predicted protein of 497 amino acid residues. The deduced amino acid sequence of the sialyltransferase had no significant similarity to mammalian sialyltransferases and did not contain sialyl motifs, but did show high homology to another marine bacterial sialyltransferase, a beta-galactoside alpha2,6-sialyltransferase produced by P. damselae JT0160. The acceptor substrate specificity of the new enzyme was similar to that of the alpha2,6-sialyltransferase from P. damselae JT0160, but its activity was maximal at pH 8. This property is quite different from the properties of all mammalian and bacterial sialyltransferases reported previously, which have maximal activity at acidic pH. In general, both sialosides and cytidine-5'-monophospho-N-acetylneuraminic acid, the common donor substrate of sialyltransferases, are more stable under basic conditions. Therefore, a sialyltransferase with an optimum pH in the basic range should be useful for the preparation of sialosides and the modification of glycoconjugates, such as asialo-glycoproteins and asialo-glycolipids. Thus, the sialyltransferase obtained from P. leiognathi JT-SHIZ-145 is a promising tool for the efficient production of sialosides.