酵母C-8ステロールイソメラーゼ遺伝子のクローニングと破壊

酵母ERG2遺伝子は、エルゴステロール生合成におけるデルタ7位置へのデルタ8二重結合の異性化に必要な酵素であるC-8ステロールイソメラーゼをコードします。ERG2遺伝子は、C-8ステロールイソメラーゼ変異株（ERG2）の補完によってクローニングされました。エルゴステロール合成をERG2に回復するために必要なDNAの補完領域は、1.0 kbのStui-Bgliiフラグメントに限定されていました。ERG2遺伝子が酵母の生存率に不可欠であるかどうかを判断するために、この1.0 kbフラグメントのNDEI部位（鈍い）にLEU2遺伝子を挿入しました。ERG2置換DNAによる野生型二倍体株の形質転換により、ERG2ヌル対立遺伝子（ERG2-4 :: LEU2）を含む生存可能な半数体の生成が生じました。これらの結果は、C-8ステロールイソメラーゼ活性が酵母細胞生存率に不可欠ではないことを示唆しています。この破壊は、細胞生存率に悪影響を与えることなく破壊される経路の遠位部分における2番目のエルゴステロール生合成遺伝子を表しています。

The yeast ERG2 gene codes for the C-8 sterol isomerase, an enzyme required for the isomerization of the delta 8 double bond to the delta 7 position in ergosterol biosynthesis. The ERG2 gene was cloned by complementation of a C-8 sterol isomerase mutant strain (erg2). The complementing region of DNA required to restore ergosterol synthesis to erg2 was limited to a 1.0 kb StuI-BglII fragment. In order to determine whether the ERG2 gene was essential for yeast viability, a LEU2 gene was inserted into the NdeI site (made blunt) of this 1.0 kb fragment. Transformation of a wild type diploid strain with the ERG2 substituted DNA resulted in the generation of viable haploids containing the erg2 null allele (erg2-4::Leu2). These results suggest that the C-8 sterol isomerase activity is not essential for yeast cell viability. This disruption represents the second ergosterol biosynthetic gene in the distal portion of the pathway to be disrupted without adversely affecting cell viability.