血清アルブミンは、XTTおよびMTTアッセイで偽陽性の結果につながります

3-（4,5-ジメチルチアゾール-2-イル）-2,5-ジフェニル-2H-テトラゾリウムブロマイド（MTT）またはナトリウム2,3-ビス（2-メトキシ-4-ニトロ-5-スルフフェニルなどのテトラゾリウム塩）-2H-テトラゾリウム-5-カルボキサンリド（XTT）還元後に形成される形成は、細胞生存率を調査するために広く使用されています。細胞酵素に加えて、細胞媒体や他の物質の一部の成分はテトラゾリウム塩を減少させ、それによりこれらのアッセイを妨害します。ここでは、ウシまたはヒトの起源からの血清アルブミンのさまざまな調製が、XTTアッセイの信号の濃度依存性の増加につながる可能性があることを説明します。したがって、細胞数の過大評価と、テストする化合物の潜在的な細胞毒性効果の過小評価につながります。ヒト血清アルブミン（HSA）を使用したMTTアッセイでも同じ効果が見られました。この還元活性はタンパク質分解消化によって不活性化できないが、アルブミン中の遊離システイン残基によるものであり、システインまたはグルタチオン（GSH）が使用された場合にも観察されることを実証します。N-エチルマレイミド（NEM）の遊離システイン残基への結合は、XTTアッセイでのアルブミン干渉の減少につながります。

Tetrazolium salts like 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide (MTT) or sodium 2,3-bis-(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-2H-tetrazolium-5-carboxanilide (XTT) that form formazans after reduction are widely used to investigate cell viability. Besides cellular enzymes, some constituents of cell media and other substances reduce tetrazolium salts, thereby interfering with these assays. We describe here that different preparations of serum albumin from bovine or human origin can lead to a concentration-dependent increase in the signals of the XTT assay; therefore leading to an overestimation of cell numbers and to an underestimation of potential cytotoxic effects of compounds to be tested. The same effect was seen in the MTT assay with human serum albumin (HSA). We demonstrate that this reductive activity cannot be inactivated by proteolytic digestion, but that it is due to the free cysteine residue in albumin, and is also observed when cysteine or glutathione (GSH) are used. Binding of N-ethylmaleimide (NEM) to the free cysteine residue leads to a decrease of the albumin interference in the XTT assay.