リガンド結合アッセイにおける適切なキャリブレーション曲線フィッティング

リガンド結合アッセイのキャリブレーション曲線は、一般に、平均応答と分析対象物濃度の間の非線形関係によって特徴付けられます。通常、応答は濃度とS状の関係を示します。これらのキャリブレーション曲線の現在受け入れられている参照モデルは、最大使用可能なキャリブレーション範囲で精度と精度を最適化する4パラメーターロジスティック（4-PL）モデルです。モデルに重み付けを組み込むには、追加の労力が必要ですが、一般にキャリブレーション曲線の性能が向上します。何らかの非対称性を備えたキャリブレーション曲線の場合、5番目のパラメーター（5-PL）の導入により、実験データの適合度がさらに改善される可能性があります。代替モデルは、キャリブレーション範囲全体にわたるモデルの精度と精度のパフォーマンスを慎重に使用して使用する必要がありますが、特に4および5-PLのアルゴリズムが一般的に代替モデルを上回る上部および5-PLのアルゴリズムが上部および5-PLのアルゴリズムが優れています。4-PLモデルまたは5-PLモデルの最適なアプリケーションを可能にするために、選択した範囲にわたってキャリブレーター濃度やマルチウェルプレート上のアッセイレイアウトを配置するなど、いくつかのアッセイ設計パラメーターを考慮する必要があります。モデルへの実験データの適合は、キャリブレーターの名目およびモデル予測データの一致の評価によって評価する必要があります。

Calibration curves for ligand binding assays are generally characterized by a nonlinear relationship between the mean response and the analyte concentration. Typically, the response exhibits a sigmoidal relationship with concentration. The currently accepted reference model for these calibration curves is the 4-parameter logistic (4-PL) model, which optimizes accuracy and precision over the maximum usable calibration range. Incorporation of weighting into the model requires additional effort but generally results in improved calibration curve performance. For calibration curves with some asymmetry, introduction of a fifth parameter (5-PL) may further improve the goodness of fit of the experimental data to the algorithm. Alternative models should be used with caution and with knowledge of the accuracy and precision performance of the model across the entire calibration range, but particularly at upper and lower analyte concentration areas, where the 4- and 5-PL algorithms generally outperform alternative models. Several assay design parameters, such as placement of calibrator concentrations across the selected range and assay layout on multiwell plates, should be considered, to enable optimal application of the 4- or 5-PL model. The fit of the experimental data to the model should be evaluated by assessment of agreement of nominal and model-predicted data for calibrators.