CPEBは、初期のアセノパス卵母細胞で卵巣特異的EIF4Eおよび4E-Tと相互作用します

CPEB（細胞質ポリアデニル化元素結合タンパク質）は、卵母細胞とニューロンの翻訳の重要な調節因子です。後期アフリカスノパス卵母細胞のCPEBの以前の研究には、母体mRNAの抑制の重要な要因としてeIF4E結合タンパク質マスキンが関与していますが、マスキンは卵形成の早い段階ではないため、2番目のメカニズムが存在する必要があります。共免疫沈降およびゲルろ過アッセイを使用して、CPEBがタンパク質/タンパク質相互作用を介して、RNAヘリカーゼXP54、RNA結合タンパク質P100（PAT1）およびRAP55、EIF4E結合タンパク質4E-Tと特異的に相互作用することを示しています。EIF4Eタンパク質。驚くべきことに、これらのCPEB複合タンパク質は、1つまたは複数の生物で、Pボディ、母体、または神経顆粒成分として特徴付けられています。標準的なキャップ結合因子、eIF4G、またはeIF4A、またはマスキン、PARN、4E-BP1を含む卵形成の後半に発現したタンパク質との相互作用は検出されません。eif4eタンパク質は、卵母細胞と初期胚に限定されているeif4e1aの密接なホモログであるeif4e1bとして同定されました。EIF4E1BはCAPおよびEIF4G結合に必要なすべての残基を所有していますが、M（7）GTPに弱く結合し、eIF4Gを結合するのではなく、プルダウンアッセイで結合しますが、コンセンサスEIF4E結合部位とは独立して4E-Tに結合します。、yskeell。野生型およびY-A変異体4E-T（eif4e1bに結合するが、eif4e1aではなく結合するが）レポーターmRNAにテザーすると、翻訳をキャップ依存的に抑制し、eIF4E1b抗体の注射は減数分裂成熟を加速します。全体として、我々のデータは、CPEBがいくつかの高度に保存されたRNA結合パートナーと提携しており、4E-TとEIF4E1Bの新規ペアリングを使用して卵母細胞のタンパク質合成を阻害することを示唆しています。

CPEB (cytoplasmic polyadenylation element-binding protein) is an important regulator of translation in oocytes and neurons. Although previous studies of CPEB in late Xenopus oocytes involve the eIF4E-binding protein maskin as the key factor for the repression of maternal mRNA, a second mechanism must exist, since maskin is absent earlier in oogenesis. Using co-immunoprecipitation and gel filtration assays, we show that CPEB specifically interacts, via protein/protein interactions, with the RNA helicase Xp54, the RNA-binding proteins P100(Pat1) and RAP55, the eIF4E-binding protein 4E-T, and an eIF4E protein. Remarkably, these CPEB complex proteins have been characterized, in one or more organism, as P-body, maternal, or neuronal granule components. We do not detect interactions with eIF4E1a, the canonical cap-binding factor, eIF4G, or eIF4A or with proteins expressed late in oogenesis, including maskin, PARN, and 4E-BP1. The eIF4E protein was identified as eIF4E1b, a close homolog of eIF4E1a, whose expression is restricted to oocytes and early embryos. Although eIF4E1b possesses all residues required for cap and eIF4G binding, it binds m(7)GTP weakly, and in pull-down assays, rather than binding eIF4G, it binds 4E-T, in a manner independent of the consensus eIF4E-binding site, YSKEELL. Wild type and Y-A mutant 4E-T (which binds eIF4E1b but not eIF4E1a), when tethered to a reporter mRNA, represses its translation in a cap-dependent manner, and injection of eIF4E1b antibody accelerates meiotic maturation. Altogether, our data suggest that CPEB, partnered with several highly conserved RNA-binding partners, inhibits protein synthesis in oocytes using a novel pairing of 4E-T and eIF4E1b.