ネコ科プロインスリン免疫測光アッセイとネコ科プロインスリン酵素結合免疫吸着アッセイ（ELISA）の開発：猫のベータ細胞機能を調べるための新しい用途

ネコ糖尿病の有病率は、過去30年間で数倍増加しました。ヒトでは、肥満から糖尿病への進行は、プロインスリンの放出の変化によって特徴付けられます。特定のプロインスリン（FPI）アッセイは、猫の同様の変化を調べるために利用できませんでした。この研究の目標は、猫のベータ細胞機能を分析するためのプロインスリンアッセイを開発することでした。モノクローナル抗体は組換えFPIに対して開発され、2サイトのサンドイッチ免疫拡張法アッセイ（IRMA）および酵素結合免疫吸着剤アッセイ（ELISA）で使用されました。抗体ペアは、ウシインスリンとネコCペプチドとの交差反応性を無視できました。作業範囲は、IRMAで11-667pmol/L、ELISAで11-1111pmol/Lでした。6つの長期肥満と6匹のleanせた成人の健康な猫と血清グルコース、インスリン、およびFPI濃度で静脈内耐性試験を実施しました。グルコースに応答したプロインスリンとインスリン分泌パターンは、脂肪猫と肥満の猫の間で有意に異なっていましたが、グループ内でパターンは類似していました。両方のグループは、同様のベースラインプロインスリン/インスリン比を持っていました。しかし、肥満猫は、IVGTTの最初の15分間に有意に高いプロインスリン/インスリン比を示し、最後の30分間ではるかに低い比率を示し、インスリン需要の増加に対する時間遅延の調整を示唆しています。結論として、FPIのIRMAとELISAの開発と検証を報告します。この新しいアッセイは、FPI分泌を解明するのに役立ち、C-Petideアッセイと同様に使用して、CATSの残留ベータ細胞機能を評価できます。

The prevalence of feline diabetes mellitus has increased several-fold over the last three decades. In humans, progression from obesity to diabetes is marked by changes in the release of proinsulin. A specific proinsulin (FPI) assay has not been available to examine similar changes in cats. The goal of this study was to develop a proinsulin assay for the analysis of beta cell function in cats. Monoclonal antibodies were developed against recombinant FPI and used in a two-site sandwich immunoradiometric assay (IRMA) and enzyme-linked immunosorbent Assay (ELISA). The antibody pair had negligible cross-reactivity with bovine insulin and feline C-peptide. The working range was 11-667pmol/L for the IRMA and 11-1111pmol/L for the ELISA. An intravenous glucose tolerance test was performed in six long-term obese and six lean adult healthy cats and serum glucose, insulin, and FPI concentrations were determined. The proinsulin and insulin secretion pattern in response to glucose was significantly different between lean and obese cats but the pattern was similar within a group. Both groups had similar baseline proinsulin/insulin ratios; however, obese cats showed a significantly higher proinsulin/insulin ratio during the first 15min of the IVGTT and a much lower ratio during the last 30min suggesting a time-delayed adjustment to the increased insulin demand. In conclusion, we report the development and validation of an IRMA and an ELISA for FPI. This novel assay is useful to elucidate FPI secretion and can be used similar to a C-petide assay to evaluate residual beta cell function in cats.