CPGフリールシフェラーゼレポーターベクターを使用したプロモーターCPGメチル化の機能分析

近位プロモーター内のCpGジヌクレオチドのメチル化は、しばしば転写サイレンシングと関連しています。メチル化依存性抑制は、高密度のCPG残基を特徴とする高メチル化CPG島プロモーターのために十分に確立されています。CPG装飾プロモーターに対するCPG DNAメチル化の効果は、おそらくin vitroでプロモーター活性をテストするための便利なアッセイシステムがないため、あまり特徴付けられていません。このレポートでは、CPGジヌクレオチドを完全に欠いており、トランスフェクションアッセイにおけるプロモーターDNAメチル化の効果を研究するために使用できる新しいルシフェラーゼレポーターベクターPCPGLについて説明します。多数のバックボーンCPG残基を含む従来のレポーターベクターは、メチル化するとCPGを含まないプロモーターを大幅に抑制しますが、新しいレポーターベクターは、機能的に重要なメチル化CPG残基の存在のためにのみ抑制されます。PCPGLベクターは、CPGが豊富なプロモーターおよびCPG毒性プロモーターに対するCPGメチル化の効果を研究するための有用なツールを提供します。

Methylation of CpG dinucleotides within proximal promoters is often associated with transcriptional silencing. Methylation-dependent repression is well established for hypermethylated CpG island promoters that are characterized by a high density of CpG residues. The effect of CpG DNA methylation on CpG-poor promoters is less well characterized, probably due to the lack of convenient assay systems to test promoter activities in vitro. In this report, we describe a novel luciferase reporter vector, pCpGL, which completely lacks CpG dinucleotides and can be used to study the effect of promoter DNA methylation in transfection assays. Whereas a traditional reporter vector that contains a large number of backbone CpG residues significantly represses a CpG-free promoter when methylated, our new reporter vector is only repressed due to the presence of functionally important, methylated CpG residues. The pCpGL vector provides a useful tool to study the effects of CpG methylation on CpG-rich and CpG-poor promoters.