Lubrol WXおよびTriton X-100による内部血漿膜リーフレット成分の微分可溶化

RAFT膜ドメインを分析するための一般的に使用される方法は、4度Cでの非イオン性洗剤による抽出に対する耐性に基づいています。ただし、RAFT膜ドメインの定義における異なる洗剤の選択性は疑問視されています。Triton X-100またはMDCK細胞のLubrol WX抽出後に得られた洗剤耐性膜（DRM）の脂質組成を比較して、膜に対するこれらの界面活性と溶解性またはタンパク質ではない選択性を理解するために比較しました。ルブロールとトリトンDRMの両方に、溶解物の上にコレステロールが濃縮されたため、膜ラフトの特性と一致する特性が示されました。ただし、2つのDRM画分は、内膜リーフレットと外膜リーフレットの脂質の比率が大きく異なりました。ルブロールDRMは、特に長い脂肪アシル鎖を持つポリ不飽和種を含むホスファチジルエタノールアミンで濃縮されていました。ルブロールとトリトンDRMSは、細胞質リーフレットに固定されたRAFT膜貫通タンパク質とRAFTタンパク質の量も異なりました。我々の結果は、ラフトの内側がホスファチジルエタノールアミンとコレステロールで濃縮されており、ルブロールwxよりもトリトンX-100の方が可溶化されていることを示唆しています。

A commonly-used method for analysing raft membrane domains is based on their resistance to extraction by non-ionic detergents at 4 degrees C. However, the selectivity of different detergents in defining raft membrane domains has been questioned. We have compared the lipid composition of detergent-resistant membranes (DRMs) obtained after Triton X-100 or Lubrol WX extraction in MDCK cells in order to understand the differential effect of these detergents on membranes and their selectivity in solubilizing or not proteins. Both Lubrol and Triton DRMs were enriched with cholesterol over the lysate, thus exhibiting characteristics consistent with the properties of membrane rafts. However, the two DRM fractions differed considerably in the ratio between lipids of the inner and outer membrane leaflets. Lubrol DRMs were especially enriched with phosphatidylethanolamine, including polyunsaturated species with long fatty acyl chains. Lubrol and Triton DRMs also differed in the amount of raft transmembrane proteins and raft proteins anchored to the cytoplasmic leaflet. Our results suggest that the inner side of rafts is enriched with phosphatidylethanolamine and cholesterol, and is more solubilized by Triton X-100 than by Lubrol WX.