蛍光マーカーDSREDおよびGFPの発現は、筋肉菌根菌の核局在化信号に融合しました。

ここでは、生物学的アプローチとAgrobacterium Tumefaciensを介した形質転換を使用して、Glomus Intraradicesの蛍光記者DSREDおよびGFP（緑色蛍光タンパク質）を導入するin vivoで筋肉菌菌菌（AM）菌を監視しました。両方のレポーター遺伝子は、核への蛍光を標的にするために、アスペルギルスニデュラン転写因子Stuaの核局在信号に融合しました。DSREDの発現は、初期共生中に高度に発現した2つのグロムスモスー科プロモーターによって駆動されました。GMPMA1およびGMFOX2はA. nidulans GPDプロモーターによって駆動されました。すべてのプロモーターは、G。intraradicesおよびA. nidulansで働いていました。赤と緑の蛍光は、爆撃後にG. Intraradicesの胞子と菌糸3日の核に局在していました。しかし、表現は一時的でした。Agrobacteriumを介した形質転換の効率は非常に低かった。これらの結果は、バイオリスティックな方法により、外来DNAの頻度が高いG.内発現を可能にすることを示していますが、安定した形質転換体をレンダリングするには不十分です。DSRED vs GFPは、赤いチャネルの自己蛍光が低いため、G。intraladicesで使用するのに適した生活レポーターですが、核を標的とするため、両方のマーカー遺伝子を視覚化できます。これは、アーバスキュラー菌根プロモーターによって駆動されるAM真菌における蛍光マーカー発現の最初の報告です。

Here, arbuscular mycorrhizal (AM) fungi were monitored in vivo introducing the fluorescent reporters DsRed and GFP (green fluorescent protein) in Glomus intraradices using a biolistic approach and Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation. Both reporter genes were fused to the nuclear localization signal of the Aspergillus nidulans transcription factor StuA to target fluorescence to nuclei. Expression of DsRed was driven by two Glomus mosseae promoters highly expressed during early symbiosis, GmPMA1 and GmFOX2, while expression of GFP was driven by the A. nidulans gpd promoter. All promoters worked in G. intraradices as well as in A. nidulans. Red and green fluorescence was localized to nuclei of G. intraradices spores and hyphae 3 d after bombardment. However, expression was transient. The efficiency of the Agrobacterium-mediated transformation was very low. These results indicate that the biolistic method allows the expression of foreign DNA into G. intraradices with high frequency, but it is insufficient to render stable transformants. DsRed vs GFP is a more appropriate living reporter to be used in G. intraradices because of the lower autofluorescence in the red channel but targeted to the nucleus both marker genes can be visualized. This is the first report of fluorescent marker expression in an AM fungus driven by arbuscular mycorrhizal promoters.