ウシ血清アルブミンに結合したANSの蛍光分析：エネルギー伝達を使用して再検討された結合特性

リガンドの数やそれぞれの結合定数などの結合パラメーターの決定には、かなりの数の実験を実行する必要があります。これらには、適用される測定技術に関係なく、自由および/または結合リガンド濃度の正確な決定が含まれます。次に、実験データに適合し、結合パラメーターを抽出するために、適切な理論モデルを使用します。この研究では、ウシ血清アルブミン（BSA）と1-アニリノ-8ナフタレンスルホン酸（ANS）の相互作用が再検討されています。定常状態の蛍光分光法を使用して、BSA/ANSの結合等温線が得られ、ハーフマン・ニシダアプローチを適用しました。結合パラメーター、サイト番号、および結合部位の関連付け定数は、化学量論的なAdairモデルとJobのプロットから決定されました。得られた結合パラメーターは、エネルギー伝達技術を使用して、それぞれの結合部位のトリプトファン残基の距離と相関していました。両方のトリプトファンを互いに独立して使用するこのアプローチは、アルブミン蛍光錯体の結合メカニズムを理解するのに役立つツールとして提示されています。結果は、ANS分子が最大5つの異なる結合部位でBSAに結合することを示しています。トリプトファン残基からBSA/ANS複合体へのエネルギー移動は、4つの最高のアフィニティ結合部位（> 10（4）m（-1））が、少なくとも1つから少なくとも1つから適度に近い距離（18-27 A）に位置していることを示しています。2つのトリプトファン残基。一方、最低のアフィニティ結合部位（約10（4）m（-1））は、両方のトリプトファンから34以上離れています。

Determination of binding parameters such as the number of ligands and the respective binding constants require a considerable number of experiments to be performed. These involve accurate determination of either free and/or bound ligand concentration irrespective of the measurement technique applied. Then, an appropriate theoretical model is used to fit the experimental data, and to extract the binding parameters. In this work, the interaction between bovine serum albumin (BSA) and 1-anilino-8-naphthalene sulphonate (ANS) is revisited. Using steady state fluorescence spectroscopy, the binding isotherm of BSA/ANS was obtained applying the Halfman-Nishida approach. The binding parameters, site number, and binding site association constants, were determined from the stoichiometric Adair model and Job's plot. The binding parameters obtained were then correlated to the distance of the respective binding site to the tryptophan residues using the energy transfer technique. This approach, that uses both tryptophans independently from each other, is presented as a tool to help understand the binding mechanism of the albumin fluorescent complex. The results show that ANS molecules bind to BSA in up to five different binding sites. Energy transfer from the tryptophan residues to the BSA/ANS complex shows that the four highest affinity binding sites (>10(4) M(-1)) are located at a reasonably close distance (18-27 A) to at least one of two tryptophan residues, while the lowest affinity binding site (approximately 10(4) M(-1)) is located over 34 A away from the both tryptophans.