c elegans gonadおよび初期胚における蛍光タンパク質の発現とイメージング

Caenorhabditis elegans Gonadと初期胚は、最近、細胞と発達生物学を研究するための魅力的な後生動物モデルシステムとして浮上しました。このシステムの成功は、浸透性RNAiを介したタンパク質の枯渇と相まって、gonad/初期胚のステレオタイプのアーキテクチャと再現可能な細胞分裂に起因します。これらの機能により、特定の細胞内プロセスを監視するために、時空間分解能が高い視覚アッセイの開発が容易になりました。アッセイの発達は、蛍光融合タンパク質をコードする導入遺伝子の発現を可能にするために、生殖細胞サイレンシングを回避する方法の出現に大きく依存しています。この章では、最適な発現のためのトランスゲンの設計、弾道砲撃によるトランスジェニックワーム系統の生成、交尾によるマルチマーカー系の構築、ゴナドのライブイメージングと初期胚の構造を含む、C。elegansの生殖細胞系の蛍光タンパク質の発現とイメージングの方法について説明します。

The Caenorhabditis elegans gonad and early embryo have recently emerged as an attractive metazoan model system for studying cell and developmental biology. The success of this system is attributable to the stereotypical architecture and reproducible cell divisions of the gonad/early embryo, coupled with penetrant RNAi-mediated protein depletion. These features have facilitated the development of visual assays with high spatiotemporal resolution to monitor specific subcellular processes. Assay development has relied heavily on the emergence of methods to circumvent germline silencing to allow the expression of transgenes encoding fluorescent fusion proteins. In this chapter, we discuss methods for the expression and imaging of fluorescent proteins in the C. elegans germline, including the design of transgenes for optimal expression, the generation of transgenic worm lines by ballistic bombardment, the construction of multimarker lines by mating, and methods for live imaging of the gonad and early embryo.