[熱ショックを受けた腫瘍細胞溶解物でパルスされた同種樹状細胞ワクチンは、抗腫瘍免疫を高めることができます]

目的：熱ショックタンパク質（HSP）-70リッチ腫瘍細胞溶解物でパルスされた同種の樹状細胞が抗腫瘍免疫を高めることができるかどうかを調査します。 方法：マウスルイス肺癌細胞を、熱ショックを受けるために、43度Cの温度43度Cの水に1時間浸しました。C57BLK（B））HSP70発現の増加を引き出すために、LLCは凍結解凍によって溶解し、上清を収集しました（LHTCL）。樹状細胞（DC）は、同種近交系マウス（615kkまたはBALB/CKD）の骨髄（BM-DCS）から分離され、心臓ショックを受けたLHTCLで刺されました。BM-DCの表現型は、フローサイトメトリー（FCM）によって分析されました。IL-12のレベルはELISAによって検出されました。LHTCLによってパルスされたBALB/CマウスのBM-DCは、ワクチンとしてC57BLマウスのフットパッドに注入されました。免疫組織化学を受ける。LHTCLの誘導性HSP70は、ウエスタンブロッティングによってアッセイされました。未熟DCによるLHTCLを取り上げる能力は、in vitroでの食作用実験によって評価され、レシピエントDCによる同種DCのCFSE標識標識DCの取り込みは、in vivoでの実験をトレースすることによって評価されました。上清サイトカイン放出は、サンドイッチELISAによって決定されました。二重染色されたDCは、FCMおよび共焦点顕微鏡で確認されました。細胞毒性活性は、LDH放出アッセイによって評価されました。ワクチンの免疫効果は、LLC移植モデルおよびLLCを含む初期段階のマウスの治療実験における免疫プロフィラキスによって評価されました。 結果：43度C加熱により、LLCSで誘導性HSP70の発現が大幅に増加しました。同種の未熟DCは、LHTCLを取り込む完全な能力を示し、DC表面およびIL-12分泌でCD86分子の発現を強化し、DCの成熟を促進したことを示しました。同種DC/LHTCLの皮下注射により、レシピエントDCによる同種DCの取り込みが促進されました。同種DC/LHTCLワクチンで免疫化されたC57BLマウスの脾臓細胞は、実行可能なLLCを特異的に殺し、TH-1関連のサイトカイン（すなわち、高レベルのINF-GAMMAおよび低レベルのIL-4/IL-10）を分泌しました。LLC移植の免疫予防の実験とLLCを含むC57BLマウスの治療により、同種DC/LHTCLによる免疫がLLCSの成長を妨げたり遅延させたりしたことが確認されました。 結論：熱ショックを受けたHSP70リッチ腫瘍細胞ライセートで脈打った同種DCのワクチンによる免疫は、抗腫瘍免疫を高めることができます。

OBJECTIVE: To explore whether the allogeneic dendritic cells-pulsed with heat shock protein (HSP)-70-rich tumor cell lysate can enhance the antitumor immunity. METHODS: Mouse Lewis lung cancer cells were dipped into water of the temperature of 43 degrees C for 1 h so as to undergo heat shock. C57BLK(b)) to elicit increased hsp70 expression, The LLCs were lysed by freeze thawing and the supernatant was collected (LhTCL). Dendritic cells (DCs) were isolated from allogeneic inbred mice (615Kk or BALB/CKd) bone marrow (Bm-DCs), and were pulsed with the LhTCL that underwent heart shock. The phenotypes of the Bm-DCs were analyzed by flow cytometry (FCM). The level of IL-12 was detected by ELISA. The Bm-Dcs of Balb/c mice that were pulsed by LhTCL or not, were injected into the foot pads of C57BL mice as vaccine, 3 d later the lymph nodes in the drainage area of popliteal fossa were taken out to make single cell suspension to undergo immunohistochemistry. Inducible hsp70 in LhTCL was assayed by Western Blotting. The ability of taking up LhTCL by immature DC was evaluated by phagocytosis experiment in vitro and the uptake of CFSE labeled allogeneic DC by recipient DC was evaluated by tracing experiment in vivo. The supernatant cytokine release was determined by sandwich ELISA. Double stained DC was confirmed by FCM and confocal microscopy. Cytotoxic activity was assessed by LDH release assay. The immuno-effect of vaccine was valued by immunoprophylaxis in LLC transplanted model and therapy experiment of LLC-bearing mice of early stage. RESULT: 43 degrees C heating significantly increased the expression of inducible hsp70 in the LLCs. The allogeneic immature DC s showed full ability to uptake LhTCL and enhanced the expression of CD86 molecules on DC surface and IL-12 secretion, showing that they promoted the maturation of DCs. Subcutaneous injection of allogeneic DC/LhTCL promoted the uptake of allogeneic DC by recipient DC. The spleen cells from the C57BL mice immunized with allogeneic DC/LhTCL vaccine specifically killed the viable LLCs, and secreted Th-1 related cytokine (i.e. high level of INF-gamma and low level of IL-4/IL-10). The experiment of immunoprophylaxis of LLC transplant and therapy of LLC-bearing C57BL mice both confirmed that immunization with allogeneic DC/LhTCL prevented or delayed the growth of LLCs, which elicited higher immunological effect than that with syngeneic DCs/HLTCL. CONCLUSION: Immunization with vaccine of allogeneic DC pulsed with heat shocked hsp70-rich tumor cell lysate is able to enhance antitumor immunity.