高性能液体クロマトグラフィー中のカルボン酸の前umn蛍光タグ付け試薬：4-置換-7-アミノアルキラアミノ-2,1,3-ベンゾキサジアゾール

4つの新しい2,1,3-ベンゾキサジアゾールアミン試薬は、4-Nitro-7-N-Piperazino-2,1,3-Benzoxadiazole（NBD-PZ）、4-Nitro-7-N-Piperazino-2,1,3-Benzoxadiazole（NBD-PZ）で異なる官能基を持つアミン試薬（n、n-ジメチルアミノスルホニル）-7-n-ピペラジノ-2,1,3-ベンゾキサドイゾール（dbd-pz）、4-（n、n-ジメチルアミノスルフォニル）-n-n-cadaverino-2,1,3--ベンゾキサドイアゾール（DBD-CD）およびアンモニウム7-N-ピペラジーノ-2,1,3-ベンゾキサジアゾール-4-スルホン酸（SBD-PZ）]は、高性能液体クロマトグラフィーのカルボン酸の蛍光誘導タギング試薬として合成されました。SBD-PZを除く試薬は、活性化剤の存在下で室温でカルボン酸と反応して蛍光付加物を生成しました。DBD-PZ、DBD-CD、およびNBD-PZでタグ付けされたアラキド酸の最大波長は、それぞれ569 nm（励起、440 nm）、561 nm（励起、437 nm）、および541 nm（励起、470 nm）でした。[ジエチルホスホロシアニド酸（DEPC）、ジフェニルホスホールアジド（DPPA）、1-エチル-3-（3-ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（EDC） - ピリジン、2.2'-ジピリジルジスルフィド - トリプヘニルホスフィナ（Mukaiya（Mukaiy））をテストしたさまざまな活性化剤の中で - クロロ-1-メチルピリジニウムヨウ化物 - トリエチルアミン（ムカイヤマB）]、depcおよびムカヤマAは、他のものよりも効果的でした。ピペラジーノ試薬（DBD-PZおよびNBD-PZ）をタグ付け試薬として使用した場合、ムカヤマAの存在下での誘導体化反応は、DEPCの存在下での誘導反応よりも速かった。ムカヤマAの存在下での反応は30分後に完了しましたが、活性化剤に由来する未知のピークがクロマトグラムに現れました。蛍光ピーク強度は、DEPCの存在下で比較されました。DEPCの存在下で6時間反応後に得られた蛍光ピーク領域の順序は、DBD-PZがNBD-PZよりも大きいDBD-PZでした。アセトニトリル中のDBD-PZ（またはDBD-CD）およびDEPC（またはムカヤマA）で誘導された13の飽和遊離脂肪酸（FFA）を、逆位相ODSカラムの線形勾配溶出により完全に分離しました。8つの薬物（イブプロフェン、インドメタシン、ディノプロスト、プロスタグランジンE1、デヒドロチョリ酸、ウルソデソキシコール酸、ハイドロカルチゾンコハイド酸塩、およびコハイドロンのコハイドロン）もDEPCの存在下でDBD-PZでタグ付けされ、アイソクロンティック溶出によって分離されました。DBD-PZでタグ付けされたFFAの検出限界（信号対雑音比= 3）は3.2-4.7 FMOLの範囲でしたが、薬物の検出は3.9-14 FMOLの範囲でした。

Four new 2,1,3-benzoxadiazole amine reagents having different functional groups at the 4- and 7-positions, [4-nitro-7-N-piperazino-2,1,3-benzoxadiazole (NBD-PZ), 4-(N,N-dimethylaminosulphonyl)-7-N-piperazino-2,1,3-benzoxad iazole (DBD-PZ), 4-(N,N-dimethylaminosulphonyl)-7-N-cadaverino-2,1,3-benzoxad iazole (DBD-CD) and ammonium 7-N-piperazino-2,1,3-benzoxadiazole-4-sulphonate (SBD-PZ)] were synthesized as fluorogenic tagging reagents for carboxylic acids in high-performance liquid chromatography. The reagents, except SBD-PZ, reacted with carboxylic acid at room temperature in the presence of activation agents to produce fluorescent adducts. The maximum wavelengths of arachidic acid tagged with DBD-PZ, DBD-CD and NBD-PZ were 569 nm (excitation, 440 nm), 561 nm (excitation, 437 nm) and 541 nm (excitation, 470 nm), respectively. Among various activation agents tested [diethyl phosphorocyanidate (DEPC), diphenyl phosphoroyl azide (DPPA), 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide (EDC)-pyridine, 2.2'-dipyridyl disulphide-triphenylphosphine (Mukaiyama A) and 2-chloro-1-methylpyridinium iodide-triethylamine (Mukaiyama B)], DEPC and Mukaiyama A were more effective than the others. When the piperazino reagents (DBD-PZ and NBD-PZ) were used as the tagging reagents, the derivatization reaction in the presence of Mukaiyama A was faster than that in the presence of DEPC. Although the reaction in the presence of Mukaiyama A was completed after 30 min, an unknown peak derived from the activation agent appeared on the chromatograms. The fluorescence peak intensities were compared in the presence of DEPC. The order of the fluorescence peak areas obtained after reaction for 6 h in the presence of DEPC was DBD-PZ greater than DBD-CD greater than NBD-PZ. Thirteen saturated free fatty acids (FFAs) derivatized with DBD-PZ (or DBD-CD) and DEPC (or Mukaiyama A) in acetonitrile were separated completely by linear gradient elution on a reversed-phase ODS column. Eight drugs (ibuprofen, indomethacin, dinoprost, prostaglandin E1, dehydrocholic acid, ursodesoxycholic acid, hydrocartisone succinate and prednisolone succinate) were also tagged with DBD-PZ in the presence of DEPC and separated by isocratic elution. The detection limits (signal-to-noise ratio = 3) of FFAs tagged with DBD-PZ were in the range 3.2-4.7 fmol, whereas those of drugs were in the range 3.9-14 fmol.