C2C12筋管の培養におけるハウスキーピング遺伝子のmRNA発現に対するジメチルスルホキシドとデキサメタゾンの効果

定量的リアルタイムRT-PCRを使用して、ハウスキーピング遺伝子ベータ - アクチン（ACTB）、グリセルアルデヒド-3-リン酸デヒドロゲーゼ（GAPDH）のmRNA発現レベルに対するジメチルスルホキシド（DMSO）とデキサメタゾン（DEX）の効果を調査しました。ベータ - グルクロニダーゼ（GUSB）、ヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ1（HPRT1）、ホスホグリセル酸キナーゼ1（PGK1）、ペプチジルプロリルイソメラーゼA（PPIA）、およびC2C12ミオトベスの培養におけるトランスフリン受容体（TFRC）。筋芽細胞細胞から筋管まで区別していたC2C12細胞のHPRT1 mRNAレベルに対するACTB mRNAレベルの比率は、培養の0から120Hに減少しましたが、TFRC mRNAレベルのHPRT1 mRNAレベルの比は培養の0から120Hに増加しました。HPRT1 mRNAレベルに対するGAPDH、GUSB、PGK1、およびPPIA mRNAレベルの比率は、培養の0〜120時間のままでした。すべてのハウスキーピング遺伝子mRNAレベルは、0.1％以下のDMSO濃度への暴露の影響を受けませんでした。GAPDH mRNAレベルはDEXによって増加しましたが、ACTBおよびPGK1 mRNAレベルはDEXによって有意に減少しました。GUSB、PPIA、およびTFRC mRNAレベルは、DEXへの暴露の影響を受けませんでした。したがって、GUSB、HPRT1、およびPPIAは、C2C12細胞の培養におけるmRNA発現レベルを評価するための適切な内部コントロールです。

We used quantitative real-time RT-PCR to investigate the effects of dimethyl sulfoxide (DMSO) and dexamethasone (Dex) on the mRNA expression levels of the housekeeping genes beta-actin (ACTB), glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH), beta-glucuronidase (GUSB), hypoxanthine phosphoribosyltransferase 1 (HPRT1), phosphoglycerate kinase 1 (PGK1), peptidylprolyl isomerase A (PPIA), and transferrin receptor (TFRC) in cultures of C2C12 myotubes. The ratios of ACTB mRNA levels to the HPRT1 mRNA level in C2C12 cells that were differentiating from myoblast cells to myotubes decreased from 0 to 120h of culture, whereas the ratios of TFRC mRNA levels to the HPRT1 mRNA level increased from 0 to 120h of culture. The ratios of GAPDH, GUSB, PGK1, and PPIA mRNA levels to the HPRT1 mRNA level remained constant from 0 to 120h of culture. All housekeeping gene mRNA levels were unaffected by exposure to DMSO concentrations of 0.1% or less. The GAPDH mRNA level was increased by Dex, while the ACTB and PGK1 mRNA levels were significantly decreased by Dex. The GUSB, PPIA, and TFRC mRNA levels were unaffected by exposure to Dex. GUSB, HPRT1, and PPIA are thus suitable internal controls for evaluating mRNA expression levels in cultures of C2C12 cells.