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Current protocols in cell biology2001May01Vol.Chapter 3issue()

密度勾配遠心分離による粗ミトコンドリア画分の精製

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文献タイプ:
  • Journal Article
概要
Abstract

異なる遠心分離によって調製されたほとんどのミトコンドリアは、リソソーム、ペルオキシソーム、尿細管膜、および少量の小胞体によってある程度汚染されています。スクイ、パーコール、ニコデンツ、ヨディキサノールなど、さまざまな密度培地を使用した密度勾配遠心分離はここで説明されており、ミトコンドリアのより純粋な画分を調製するために使用されます。得られた勾配は、コハク酸デヒドロゲナーゼ(ミトコンドリア)、B-ガラクトシダーゼ(リソソーム)、およびカタラーゼ(ペルオキシソーム)の3つのマーカー酵素について分析できます。

異なる遠心分離によって調製されたほとんどのミトコンドリアは、リソソーム、ペルオキシソーム、尿細管膜、および少量の小胞体によってある程度汚染されています。スクイ、パーコール、ニコデンツ、ヨディキサノールなど、さまざまな密度培地を使用した密度勾配遠心分離はここで説明されており、ミトコンドリアのより純粋な画分を調製するために使用されます。得られた勾配は、コハク酸デヒドロゲナーゼ(ミトコンドリア)、B-ガラクトシダーゼ(リソソーム)、およびカタラーゼ(ペルオキシソーム)の3つのマーカー酵素について分析できます。

Most mitochondria prepared by differential centrifugation are contaminated to some extent by lysosomes, peroxisomes, tubular Golgi membranes, and small amounts of endoplasmic reticulum. Density gradient centrifugation using a variety of density media--sucrose, Percoll, Nycodenz, Iodixanol--is described here and is used to prepare purer fractions of mitochondria. The resulting gradient can be analyzed for three marker enzymes: succinate dehydrogenase (mitochondria), b-galactosidase (lysosomes), and catalase (peroxisomes).

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