デンビノビンは、Aktの不活性化、悪い活性化、ミトコンドリア機能障害を介してヒト肺腺癌細胞のアポトーシスを誘導します

増加している証拠により、エフェメランサロンコフィラから分離されたデンビノビンが癌細胞に細胞毒性効果を発揮することが示されました。この研究の目的は、デンビノビンがヒト肺腺癌細胞におけるアポトーシスとアポトーシスメカニズムを誘導するかどうかを調査することでした（A549）。Denbinobin（1-20microm）は、濃度依存的に細胞死を引き起こしました。フローサイトメトリー分析とアネキシンV標識は、デンビノビンがアポトーシス細胞の割合を増加させることを実証しました。デンビノビンで処理されたA549細胞は、形態学的変化やDNA断片化を含むアポトーシスの典型的な特性を示しました。デンビノビンは、カスパーゼ3の活性化を誘導し、n-benzyloxycarbonyl-val-ala-asp-fluoromethylketone（zvad-fmk）である広範囲のカスパーゼ阻害剤であるデンビノビン誘発細胞死を予防しました。デンビノビンは、ミトコンドリア膜電位の喪失と、シトクロムC、2番目のミトコンドリア由来のカスパーゼ（SMAC）、およびアポトーシス誘導因子（AIF）を含むミトコンドリアアポトーシスタンパク質の放出を誘発しました。さらに、デンビノビン誘発性の悪い活性化には、14-3-3とのバッドの解離、およびBCL-XLとの関連性が伴いました。さらに、デンビノビンは、時間依存的にAktの不活性化を誘発しました。野生型と構成的に活性なAktの両方を伴うA549細胞のトランスフェクションは、デンビノビン誘発性の悪い活性化と細胞アポトーシスを有意に抑制しました。これらの結果は、Aktの不活性化、悪化、ミトコンドリア機能障害、カスパーゼ3活性化、およびAIF放出がデンビノビン誘発細胞アポトーシスに寄与することを示唆しています。

Increasing evidence demonstrated that denbinobin, isolated from Ephemerantha lonchophylla, exert cytotoxic effects in cancer cells. The purpose of this study was to investigate whether denbinobin induces apoptosis and the apoptotic mechanism of denbinobin in human lung adenocarcinoma cells (A549). Denbinobin (1-20microM) caused cell death in a concentration-dependent manner. Flow cytometric analysis and annexin V labeling demonstrated that denbinobin increased the percentage of apoptotic cells. A549 cells treated with denbinobin showed typical characteristics of apoptosis including morphological changes and DNA fragmentation. Denbinobin induced caspase 3 activation, and N-benzyloxycarbonyl-Val-Ala-Asp-fluoromethylketone (zVAD-fmk), a broad-spectrum caspase inhibitor, prevented denbinobin-induced cell death. Denbinobin induced the loss of the mitochondrial membrane potential and the release of mitochondrial apoptotic proteins including cytochrome c, second mitochondria derived activator of caspase (Smac), and apoptosis-inducing factor (AIF). In addition, denbinobin-induced Bad activation was accompanied by the dissociation of Bad with 14-3-3 and the association of Bad with Bcl-xL. Furthermore, denbinobin induced Akt inactivation in a time-dependent manner. Transfection of A549 cells with both wild-type and constitutively active Akt significantly suppressed denbinobin-induced Bad activation and cell apoptosis. These results suggest that Akt inactivation, followed by Bad activation, mitochondrial dysfunction, caspase 3 activation, and AIF release, contributes to denbinobin-induced cell apoptosis.