金属化アフィニティクロマトグラフィー

アミノ末端またはカルボキシル末端のいずれかに6つの連続したヒスチジン残基を持つように設計された組換えタンパク質は、共有結合した窒化酸（NTA）によって固定されたニッケルイオン（Ni2+）を含む樹脂を使用して精製できます。金属化アフィニティクロマトグラフィー（MCAC）として知られるこの手法は、ネイティブまたは変性タンパク質のいずれかで容易に実行できます。関心のあるタンパク質で構成される融合タンパク質を作成するための技術については、（MCACによる精製のため）、ヒスチジンの尾を持つ（MCACによる精製のため）。基本的なプロトコルは、ヒスチジンテール融合タンパク質の発現と、MCACによるネイティブ形態の精製を説明しています。2つの代替プロトコルは、変性条件下でのMCACによるヒスチジンテール融合タンパク質の精製と、透析または固相の再飽和度のいずれかによる再飽和度を説明しています。サポートプロトコルは、NTA樹脂の精製生成物と再生の分析のために提供されます。これらのプロトコルはすべて、あらゆるタンパク質発現システムに簡単に適応できます。

Recombinant proteins engineered to have six consecutive histidine residues on either the amino or carboxyl terminus can be purified using a resin containing nickel ions (Ni2+) that have been immobilized by covalently attached nitrilotriacetic acid (NTA). This technique, known as metal-chelate affinity chromatography (MCAC), can readily be performed with either native or denatured protein. Techniques are discussed for creating a fusion protein consisting of the protein of interest with a histidine tail attached (for purification by MCAC). The basic protocol describes expression of histidine-tail fusion proteins and their purification in native form by MCAC. Two alternate protocols describe purification of histidine-tail fusion proteins by MCAC under denaturing conditions and their renaturation by either dialysis or solid-phase renaturation. Support protocols are provided for analysis of the purified product and regeneration of the NTA resin. All of these protocols are easily adaptable to any protein expression system.