E1Aの経由的な変異体は、トランス活性化ドメインの亜鉛指が転写因子に結合するという遺伝的証拠を提供します

アデノウイルスの289R E1Aタンパク質は、初期のウイルスおよび特定の細胞遺伝子の転写を刺激します。トランスクライベーションには、亜鉛フィンガーを含む残基140〜188が必要です。いくつかの研究は、E1Aによるトランス活性化が細胞転写因子を介して媒介されることを示しています。特に、野生型E1Aトランス活性化を阻害する主要なE1Aポイント変異体HR5（Ser-185からASN）の能力が、細胞因子の隔離に起因するように提案されました。部位指向の突然変異誘発を使用して、内部のすべての残基を個別に交換し、トランス活性化ドメインに保守的なアミノ酸と隣接し、16の臨界残基が明らかになりました。亜鉛フィンガー（カルボキシル領域183-188）の連続ストレッチC末端に横たわっている6つの個々の置換は、大規模な表現型を与えました。トランスドミナンスは、カルボキシル領域全体の削除によっても生成されました183-188。逆に、この領域のあらゆる臨界残基を第二サイトで置換したため、HR5タンパク質のトランス支配表現型を廃止したため、トランスドミナンスには、無傷の指領域147-177が絶対に必要でした。これらのデータは、指領域147-177が制限細胞転写因子に結合し、カルボキシル領域183-188が個別の必須関数を提供することを示しています。さらに、トランス活性化ドメイン内の4つの負に帯電した残基が、明確な酸性活性化領域を構成しないことを示しています。E1Aのトランス活性化ドメインが、指とカルボキシル領域を介して2つの異なる細胞タンパク質標的に結合するモデルを提示します。

The 289R E1A protein of adenovirus stimulates transcription of early viral and certain cellular genes. trans-Activation requires residues 140 to 188, which encompass a zinc finger. Several studies have indicated that trans-activation by E1A is mediated through cellular transcription factors. In particular, the ability of the trans-dominant E1A point mutant hr5 (Ser-185 to Asn) to inhibit wild-type E1A trans-activation was proposed to result from the sequestration of a cellular factor. Using site-directed mutagenesis, we individually replaced every residue within and flanking the trans-activating domain with a conservative amino acid, revealing 16 critical residues. Six of the individual substitutions lying in a contiguous stretch C terminal to the zinc finger (carboxyl region183-188) imparted a trans-dominant phenotype. trans-Dominance was even produced by deletion of the entire carboxyl region183-188. Conversely, an intact finger region147-177 was absolutely required for trans-dominance, since second-site substitution of every critical residue in this region abrogated the trans-dominant phenotype of the hr5 protein. These data indicate that the finger region147-177 bind a limiting cellular transcription factor and that the carboxyl region183-188 provides a separate and essential function. In addition, we show that four negatively charged residues within the trans-activating domain do not comprise a distinct acidic activating region. We present a model in which the trans-activating domain of E1A binds to two different cellular protein targets through the finger and carboxyl regions.