分析物の自然に発生する同位体は、二重に重水素化された内部標準測定に干渉する可能性があります

背景：内部標準は、定量的質量分析（MS）アッセイに不可欠であり、ソースでのサンプル抽出とイオン化の変動を修正します。液体クロマトグラフィーMSアッセイでは、いくつかの原子が安定した同位体に置き換えられた分析物の類似体、例えば（2）H（D、重水素）は、多くの場合、内部標準として使用されます。 方法：例として、液体クロマトグラフィータンデムMSアッセイの内部標準チャネルにある内部標準チャネルにおける分析物の天然に発生する同位体による干渉の可能性を例にとって評価しました。質量スペクトルを分析し、さまざまな濃度の内部標準で標準曲線を調製して、干渉の程度を決定しました。 結果：質量スペクトルは、M/Z 365でコルチゾールの天然に発生する同位体が、D2コルチゾールと断片と同じように作用して、同じM/Zの娘イオンを与えることを示しました。したがって、コルチゾール-365は誤って、しかし大幅に検出された内部標準の量を増加させる可能性があり、これにより、コルチゾールの相対的な反応が随時減少します。さまざまな濃度の内部標準の標準曲線は、この現象がアッセイの直線性に影響を与える可能性があることを示しました。 結論：我々の結果は、二重に重水素化された内部標準が使用されている場合、アッセイ開発には注意が必要であることを示しています。内部標準遷移に関心のある分析物の自然に発生する同位体による干渉が可能であり、必要な範囲でアッセイの直線性を可能にする適切な内部標準濃度が選択されることを確認することが重要です。

BACKGROUND: Internal standards are essential in quantitative mass spectrometry (MS) assays to correct for variability in sample extraction and ionization at the source. In liquid chromatography MS assays, analogues of the analyte with several atoms replaced by their stable isotopes, e.g. (2)H (D, deuterium) are often used as internal standards. METHODS: Possible interference by naturally occurring isotopes of an analyte in the internal standard channel in a liquid chromatography tandem MS assay was assessed using cortisol and its deuterated internal standard, D2-cortisol, as an example. Mass spectra were analysed and standard curves were prepared with varying concentrations of internal standard to determine the extent of any interference. RESULTS: The mass spectra showed that a naturally occurring isotope of cortisol at m/z 365 acts in the same way as D2-cortisol and fragments to give a daughter ion of the same m/z. Cortisol-365 can therefore falsely, but significantly, increase the amount of internal standard detected, and this will concomitantly decrease the relative response for cortisol. The standard curves with varying concentrations of internal standard showed that this phenomenon can affect the linearity of an assay. CONCLUSIONS: Our results show that care is needed in assay development when doubly deuterated internal standards are used. Interference by naturally occurring isotopes of the analyte of interest in the internal standard transition is possible and it is important to ensure that an appropriate internal standard concentration is chosen that permits linearity of the assay over the required range.