リポフェクタミンrnaimax：ヒト胚性幹細胞における効率的なsiRNAトランスフェクション試薬試薬

RNA干渉方法論は、特定の遺伝子発現を抑制し、機能喪失変異を模倣し、in vitroおよびin vivo遺伝子機能分析を可能にします。新しいトランスフェクション試薬であるリポフェクタミンRnaimaxは、小さな干渉RNA（siRNA）を間葉系幹細胞および神経幹細胞に送達する際の高効率が確認されています。この研究では、3つのトランスフェクション試薬（リポフェクタミンrnaimax、オリゴフェクトアミン、リポフェクタミン2000）を使用して、siRNAをヒト胚性幹（HES）細胞に供給し、複数能力の主要なレギュレータである緑色蛍光タンパク質導入遺伝子の増強効率とOCT4のサイレンシング効率を比較しました。その結果、siRNAは、他の2つのトランスフェクション試薬と比較してリポフェクタミンrnaimaxによってより効率的にHES細胞に送達することができ、標的遺伝子の高効率ノックダウンは、低濃度のsiRNAでもリポフェクタミンrnaimaxによって得られました。定量的リアルタイムPCRは、コントロールsiRNAと比較して、リポフェクタミンrnaimaxによる同種OCT4 siRNAトランスフェクションを伴うOCT4転写産物の約90％のノックダウンを示しました。これらの結果は、Lipofectamine rnaimaxがsiRNAをHES細胞に供給するための効率的で優れたトランスフェクション試薬であることを実証しました。

RNA interference methodology suppresses specific gene expression, thus mimicking loss-of-function mutation and enabling in vitro and in vivo gene function analysis. Lipofectamine RNAiMAX, a new transfection reagent, has been confirmed high efficiency in delivering small interfering RNA (siRNA) into mesenchymal stem cells and neural stem cells. In this study, we used three transfection reagents (Lipofectamine RNAiMAX, Oligofectamine and Lipofectamine 2000) to deliver siRNA into human embryonic stem (hES) cells and compared the silencing efficiency of enhanced green fluorescent protein transgene and Oct4, a key regulator of pluripotency. As a result, siRNA can be delivered into hES cells more efficiently by Lipofectamine RNAiMAX compared with the other two transfection reagents and high efficient knockdown of target genes was obtained by Lipofectamine RNAiMAX even at a low concentration of siRNA. Quantitative real-time PCR showed approximately 90% knockdown of Oct4 transcript with cognate Oct4 siRNA transfection by Lipofectamine RNAiMAX compared to control siRNA. These results demonstrated that Lipofectamine RNAiMAX is an efficient and excellent transfection reagent for delivering siRNA into hES cells.