機能的補完により、Schizosaccharomyces PombeのATPスルフリュリラーゼ遺伝子のクローニング

Schizosaccharomyces PombeのATP Sulphurylase遺伝子は、ATPスルフリュリラーゼに欠陥があったと思われるセレン酸耐性変異体のシステイン補助栄養素の補完によってクローニングされています。S. pombeの硫酸塩の非活性化（システイン補助栄養性）およびセレン酸耐性変異体を、野生型S. Pombeゲノムライブラリーと硫酸塩を活用するクローンで形質転換しました。ATPスルフリュリラーゼ酵素をコードするオープンリーディングフレームは、硫酸塩同化の回復に関与することがわかった。形質転換体は、野生型株と同じくらいセレン酸に敏感になり、極性栄養株と同じように同等の量のATPスルフリュレーゼを生成しました。クローン化されたATPスルフリュリラーゼ遺伝子（SUA1）は、異なる等遺伝子または非病原性S. selenate耐性変異体をクローニング宿主として使用した場合、ARSベクターの効率的な選択マーカーであることが証明されました。Sua1-Bearing Multicopy VectorsによるSua1-変異の補完は、有用なデュアル陽性および負の選択マーカーとして機能します。クローン化されたSuA1遺伝子は、Saccharomyces cerevisiaeのMet3（ATPスルフリューゼ不足）変異も補完しました。

The ATP sulphurylase gene of Schizosaccharomyces pombe has been cloned by complementation of cysteine auxotrophy of a selenate-resistant mutant, which supposedly had a defect in ATP sulphurylase. A sulphate nonutilizing (cysteine auxotrophic) and selenate-resistant mutant of S. pombe was transformed with a wild-type S. pombe genomic library and sulphate-utilizing clones were isolated. The open reading frame encoding the ATP sulphurylase enzyme was found to be responsible for the restoration of sulphate assimilation. Transformants became as sensitive for selenate as the wild-type strain and produced a comparable amount of ATP sulphurylase as the prototrophic strains. The cloned ATP sulphurylase gene (sua1) proved to be an efficient selection marker in an ARS vector, when different isogenic or nonisogenic S. pombe selenate-resistant mutants were used as cloning hosts. Complementation of sua1- mutations by sua1-bearing multicopy vectors functions as a useful dual positive and negative selection marker. The cloned sua1 gene also complemented the met3 (ATP sulphurylase deficient) mutation in Saccharomyces cerevisiae.