GFPではなくCFPおよびYFPは、ラット肝成体幹細胞の安定した蛍光マーキングを提供します

成体幹細胞（ASC）におけるレポーター遺伝子の安定した発現は、幹細胞生物学に重要な用途を持っています。ASCとその子孫を追跡する能力を使用して、非シト毒性の蛍光レポーター遺伝子をASCのゲノムに統合する能力は、移植研究に特に望ましいです。蛍光タンパク質の使用は、短時間のスケールでのタンパク質と細胞機能の調査を大いに支援しました。対照的に、長時間のスケールでの研究の発現の変動性が低い安定して発現する細胞株の得られた状態は、しばしば問題があります。この困難は、一般的に使用されるレポーターである緑色蛍光タンパク質（GFP）の細胞毒性によるものであることを示しています。ラット肝ASC株を安定にマークしようとする試み中のGFP特異的毒性効果を回避し、したがって、安定した長期蛍光ASCを得るために、GFPに加えて、シアン蛍光タンパク質（CFP）および黄色の蛍光タンパク質（YFP）を評価しました。。安定したGFP発現株を導出することはできませんでしたが、CFPまたはYFPのいずれかを発現する安定した蛍光クローン（最大140倍）が確立されました。分化した子孫細胞を産生するように蛍光マークされたASCが誘導されると、安定した蛍光発現が維持されました。この特性は、移植研究において蛍光を持ってマークされたASCとそれらの分化した子孫を追跡する研究に不可欠です。

The stable expression of reporter genes in adult stem cells (ASCs) has important applications in stem cell biology. The ability to integrate a noncytotoxic, fluorescent reporter gene into the genome of ASCs with the capability to track ASCs and their progeny is particularly desirable for transplantation studies. The use of fluorescent proteins has greatly aided the investigations of protein and cell function on short-time scales. In contrast, the obtainment of stably expressing cell strains with low variability in expression for studies on longer-time scales is often problematic. We show that this difficulty is partly due to the cytotoxicity of a commonly used reporter, green fluorescent protein (GFP). To avoid GFP-specific toxicity effects during attempts to stably mark a rat hepatic ASC strain and, therefore, obtain stable, long-term fluorescent ASCs, we evaluated cyan fluorescent protein (CFP) and yellow fluorescent protein (YFP), in addition to GFP. Although we were unable to derive stable GFP-expressing strains, stable fluorescent clones (up to 140 doublings) expressing either CFP or YFP were established. When fluorescently marked ASCs were induced to produce differentiated progeny cells, stable fluorescence expression was maintained. This property is essential for studies that track fluorescently marked ASCs and their differentiated progeny in transplantation studies.