小胞口内炎ウイルスG糖タンパク質（VSV-G）偽型レトロウイルスベクターの産生

レトロウイルス偽型は、2番目のウイルスのエンベロープタンパク質によってカプシス化された1つのレトロウイルスのゲノムとして定義されます。偽型の宿主範囲は、エンベロープタンパク質を寄付するウイルスの宿主範囲です。ここでは、ヒト腎臓293細胞に由来する293GP細胞を使用する2つの手順を説明します。1つ目は、293セルの高過渡トランスフェクション効率に基づいています。VSV-Gのレトロウイルス構造と発現プラスミドは、MLV GAGおよびPoLタンパク質を安定に発現する293GP細胞に同時トランスフェクトされます。その後、一時的に生成されたウイルスは、DNAトランスフェクション後の連続日に収穫されます。2番目の手順では、テトラサイクリンによって活性が調節されているプロモーターの制御下にあるVSV-G遺伝子を含む安定した293GP細胞株が含まれます。目的のレトロウイルスベクターを含む細胞株は、非誘導条件下で確立されます。これらの細胞株におけるVSV-G発現の誘導に続いて、感染性ウイルスを採取することができます。

Retrovirus pseudotype is defined as the genome of one retrovirus encapsidated by the envelope protein of a second virus. The host range of the pseudotype is that of the virus donating the envelope protein. Two procedures that use 293GP cells, which are derived from human kidney 293 cells, are described here. The first is based on the high transient transfection efficiency of 293 cells. The retroviral construct and an expression plasmid for VSV-G are co-transfected into 293GP cells that stably express MLV gag and pol proteins. Transiently generated virus is then harvested during consecutive days following DNA transfection. The second procedure involves stable 293GP cell lines containing the VSV-G gene under the control of a promoter whose activity is regulated by tetracycline. Cell lines containing the retroviral vector of interest are established under noninduced conditions. Infectious virus can be harvested following the induction of VSV-G expression in these cell lines.