新薬候補を評価するためのツールとして、10日間のマルチスクリーンCACO-2細胞培養と組み合わせた平行人工膜透過性アッセイ（PAMPA）

並列人工膜透過性アッセイ（PAMPA）は、初期の薬物候補の評価に広く使用されています。スループットが高く、低コストであり、自動化に適しています。この方法は、生体内吸収による合理的な予測可能性が可能になるように、膜貫通、非エネルギー依存性、薬物の拡散を評価するのに役立つことが示されています。CACO-2培養などの胃腸管を模倣する細胞培養には、傍細胞やキャリアを介した取り込みを含む他の輸送機構を考慮に入れるという利点がありますが、スループットと労働集約型です。この研究では、2つの高スループット透過性アッセイの適用性、すなわちPAMPA（PSR4P、Pion Inc.）および96ウェルCACO-2細胞アッセイ（Multiscreen、Millipore）を使用して、薬物透過性をランク付けし、受動的および活性薬物を予測するために使用されました一連の販売された薬物の吸収/分泌と、構造的に多様な薬物候補のコレクション。CACO-2細胞は、10日間にわたってマルチスクリーンハードウェアを使用して培養されましたが、細胞の整合性（TEER）を使用して評価された細胞の完全性と、単層が傍細胞マーカーであるナトリウム蛍光を輸送する能力によって培養しました。有効透過性（PEFF）データは、分光光度データを使用して計算され、事前に定義されたカットオフ値に基づいて、透過性が高く、透過性が低いとビニングされました。よく特徴付けられた薬物訓練セットの比較は、PampaとCaco-2マルチスクリーンから生成されたデータ間の少なくとも85％の一致を示しています。マルチスクリーンアプローチを使用して得られた値は、従来の21日間のCACO-2細胞アッセイを使用して文献から得られたデータにも類似していました。パンパとCACO-2のランキングの違いは、薬物流出（PAMPA（PEFF）> CACO-2（PEFF））または吸収輸送（CACO-2（PEFF）> PAMPA（PEFF））のいずれかの有用な指標でした。これらの結果は、マルチスクリーンCACO-2細胞培養と組み合わされたPampaが、新薬の受動拡散と積極的な輸送を予測するための有用な高スループットスクリーニングである可能性があることを示しています。

The parallel artificial membrane permeability assay (PAMPA) is extensively used for the evaluation of early drug candidates. It is high throughput, low cost and is amenable to automation. This method has been shown useful in assessing transmembrane, non-energy dependent, diffusion of drugs such that reasonable predictability with in vivo (passive) absorption is possible. Cell cultures mimicking the gastrointestinal tract such as the CACO-2 cultures have the advantage of taking into account other transport mechanism including paracellular and carrier-mediated uptake but are lower throughput and labor-intensive. In this study, the applicability of two high throughput permeability assays namely PAMPA (PSR4p, pION Inc.) and 96-well Caco-2 cell assay (MultiScreen, Millipore) were used to rank drug permeability as well as to predict passive and active drug absorption/secretion for a series of marketed drugs as well as a collection of structurally diverse drug candidates. CACO-2 cells were cultured using MultiScreen hardware over a period of 10 days with the integrity of the cells assessed using transepithelial electrical resistance (TEER) and by the ability of the monolayer to the transport a paracellular marker, sodium fluorescence. Effective permeability (Peff) data were calculated using spectrophotometric data and were binned based on a pre-defined cut-off values as either highly and poorly permeable. A comparison of a well characterized drug training set indicate at least 85% concordance between the data generated from PAMPA and Caco-2 MultiScreen. The values obtained using the MultiScreen approach were also similar to data obtained from the literature using the conventional 21-day Caco-2 cell assay. Differences between PAMPA and CACO-2 ranking were useful indicators of either drug efflux (PAMPA (Peff) > CACO-2 (Peff)) or absorptive transport (CACO-2 (Peff) > PAMPA (Peff)). These results indicate that PAMPA combined with the MultiScreen Caco-2 cell culture may be a useful high throughput screening for predicting passive diffusion and active transport of new drugs.