プロテインキナーゼFA（グリコーゲンシンターゼキナーゼ3）によるウシニューロフィラメントタンパク質のリン酸化

ウサギ筋からのプロテインキナーゼFA（FAはホスファターゼ1の活性因子）/グリコーゲンシンターゼキナーゼ3の高度に精製された調製物は、容易にリン酸化されたウシ神経炎症を容易にリン酸化します。3つのニューロフィラメントタンパク質、高、中、低分子タンパク質（NF-H、NF-M、およびNF-L）は、無傷のフィラメントをキナーゼとインキュベートするとリン酸化されました。個々のタンパク質を使用した実験では、NF-Mが最良の基質であることが示されました。0.13 mg/mLのタンパク質濃度では、NF-Mリン酸化の初期速度はグリコーゲンシンターゼで観察されたものの30％でした。km値は、グリコーゲン合成酵素では0.24 mg/ml（7 x 10（-7）mテトラマー）、NF-mで0.10 mg/ml（5 x 10（-7）mダイマー）でした。VMAX値は、グリコーゲン合成酵素で0.36 Mumol/min/mg、NF-Mで0.035 Mumol/min/mgでした。脱リン酸化NF-Mは、ネイティブNF-Mの半分しかリン酸化されていません。これは、キナーゼの既知の基質特異性と一致しています。in vivoにおける神経供給のリン酸化におけるFA/GSK-3の影響の可能性について説明します。

A highly purified preparation of protein kinase FA (where FA is the activating factor for phosphatase 1)/glycogen synthase kinase 3 from rabbit muscle readily phosphorylated bovine neurofilaments. All three neurofilament proteins, the high, middle, and low molecular proteins (NF-H, NF-M, and NF-L), were phosphorylated when intact filaments were incubated with the kinase. Experiments with individual proteins showed that NF-M was the best substrate. At protein concentrations of 0.13 mg/ml, the initial rate of NF-M phosphorylation was 30% of that observed for glycogen synthase. Km values were 0.24 mg/ml (7 x 10(-7) M tetramer) for glycogen synthase and 0.10 mg/ml (5 x 10(-7) M dimer) for NF-M. Vmax values were 0.36 mumol/min/mg for glycogen synthase and 0.035 mumol/min/mg for NF-M. Dephosphorylated NF-M was phosphorylated only half as much as native NF-M; this is consistent with the known substrate specificity of the kinase. The possible involvement of FA/GSK-3 in the phosphorylation of neurofilaments in vivo is discussed.