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目的：抗生物質感受性ブドウ球菌株を排出ポンプ（EPS）の既知の基質であるエチジウム臭化エチジウムの濃度に増加させる濃度に、表現型および遺伝子型を分析することにより、結果として生成される子孫の分子メカニズムを特徴付けました。臭化。 方法：S. aureus ATCC 25923は、臭化エチジウムの濃度が増加するために増殖しました。ATCC 25923とその臭化エチジウム耐性子孫ATCC 25923（ETBR）に対する8つのクラスの抗生物質、8つの生物型、および2つの染料の代表者のMICSは、6つの排出ポンプ阻害剤の有無にかかわらず測定されました（EPIS）。エピソードの存在/欠如における流出活性は、リアルタイム蛍光測定によって評価されました。8つのEP遺伝子の存在と発現は、それぞれPCRおよび定量RT-PCR（QRT-PCR）によってアッセイされました。GRLA、GYRA、およびNORAプロモーター領域の変異は、DNAシーケンスによってスクリーニングされました。 結果：親の株と比較して、ATCC 25923（ETBR）は、臭化エチジウムに対して32倍耐性があり、ビオシドや親水性フルオロキノロンにより耐性がありました。これらに対する耐性は、エピソードクロルプロマジン、チオリダジン、レセルピンによって減少する可能性があります。ATCC 25923（ETBR）による臭化エチジウムの流出の増加は、同じエピソードによって阻害される可能性があります。QRT-PCRは、NoraがATCC 25923（ETBR）で35倍過剰発現しているのに対し、残りのEP遺伝子はその発現に有意な増加を示さなかったことを示しました。Noraプロモーター領域のシーケンスにより、ATCC 25923（ETBR）で70 bpの欠失が明らかになりました。 結論：臭化エチジウムなどの四頭紀化合物への黄色ブドウ球菌への曝露は、ATCC 25923株の場合、排出量媒介応答を介したキノロンや生物化物を含むさまざまな化合物に対する生物の感受性の低下をもたらします。この変化した発現は、Noraプロモーター領域の変化に起因する可能性があります。
目的：抗生物質感受性ブドウ球菌株を排出ポンプ（EPS）の既知の基質であるエチジウム臭化エチジウムの濃度に増加させる濃度に、表現型および遺伝子型を分析することにより、結果として生成される子孫の分子メカニズムを特徴付けました。臭化。 方法：S. aureus ATCC 25923は、臭化エチジウムの濃度が増加するために増殖しました。ATCC 25923とその臭化エチジウム耐性子孫ATCC 25923（ETBR）に対する8つのクラスの抗生物質、8つの生物型、および2つの染料の代表者のMICSは、6つの排出ポンプ阻害剤の有無にかかわらず測定されました（EPIS）。エピソードの存在/欠如における流出活性は、リアルタイム蛍光測定によって評価されました。8つのEP遺伝子の存在と発現は、それぞれPCRおよび定量RT-PCR（QRT-PCR）によってアッセイされました。GRLA、GYRA、およびNORAプロモーター領域の変異は、DNAシーケンスによってスクリーニングされました。 結果：親の株と比較して、ATCC 25923（ETBR）は、臭化エチジウムに対して32倍耐性があり、ビオシドや親水性フルオロキノロンにより耐性がありました。これらに対する耐性は、エピソードクロルプロマジン、チオリダジン、レセルピンによって減少する可能性があります。ATCC 25923（ETBR）による臭化エチジウムの流出の増加は、同じエピソードによって阻害される可能性があります。QRT-PCRは、NoraがATCC 25923（ETBR）で35倍過剰発現しているのに対し、残りのEP遺伝子はその発現に有意な増加を示さなかったことを示しました。Noraプロモーター領域のシーケンスにより、ATCC 25923（ETBR）で70 bpの欠失が明らかになりました。 結論：臭化エチジウムなどの四頭紀化合物への黄色ブドウ球菌への曝露は、ATCC 25923株の場合、排出量媒介応答を介したキノロンや生物化物を含むさまざまな化合物に対する生物の感受性の低下をもたらします。この変化した発現は、Noraプロモーター領域の変化に起因する可能性があります。
OBJECTIVES: By adapting an antibiotic-susceptible Staphylococcus aureus strain to increasing concentrations of ethidium bromide, a known substrate of efflux pumps (EPs), and by phenotypically and genotypically analysing the resulting progeny, we characterized the molecular mechanisms of S. aureus adaptation to ethidium bromide. METHODS: S. aureus ATCC 25923 was grown in increasing concentrations of ethidium bromide. The MICs of representatives of eight classes of antibiotics, eight biocides and two dyes against ATCC 25923 and its ethidium bromide-resistant progeny ATCC 25923(EtBr) were determined with or without six efflux pump inhibitors (EPIs). Efflux activity in the presence/absence of EPIs was evaluated by real-time fluorometry. The presence and expression of eight EP genes were assayed by PCR and quantitative RT-PCR (qRT-PCR), respectively. Mutations in grlA, gyrA and norA promoter regions were screened by DNA sequencing. RESULTS: Compared with its parental strain, ATCC 25923(EtBr) was 32-fold more resistant to ethidium bromide and also more resistant to biocides and hydrophilic fluoroquinolones. Resistance to these could be reduced by the EPIs chlorpromazine, thioridazine and reserpine. Increased efflux of ethidium bromide by ATCC 25923(EtBr) could be inhibited by the same EPIs. qRT-PCR showed that norA was 35-fold over-expressed in ATCC 25923(EtBr), whereas the remaining EP genes showed no significant increase in their expression. Sequencing of the norA promoter region revealed a 70 bp deletion in ATCC 25923(EtBr). CONCLUSIONS: Exposure of S. aureus to quaternary compounds such as ethidium bromide results in decreased susceptibility of the organism to a wide variety of compounds, including quinolones and biocides through an efflux-mediated response, which for strain ATCC 25923 is mainly NorA-mediated. This altered expression may result from alterations in the norA promoter region.
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