親油性薬物のCACO-2透過性アッセイのためのシミュレートされた腸液の使用

腸の透過性を評価するために最も一般的に使用される方法は、ハンクス平衡塩類溶液 (HBSS) 様の緩衝液を使用して、Caco-2 細胞単層を通過する化合物フラックスを測定することです。それにもかかわらず、親油性酸薬剤はこれらの種類の緩衝液にほとんど溶けないか、まったく溶けず、トランスウェルプレート上での吸着が一般的に観察されます。吸着を低減し、溶解度を高めるには、親油性化合物の古典的な条件以外の条件で透過性アッセイを開発する必要があります。親油性化合物の回収率を高めるための最良のモデルは、頂端コンパートメントには絶食状態模擬腸液 (FaSSIF)、側底コンパートメントには 1% ウシ血清アルブミン (BSA) を含む HBSS として決定されました。このモデルにより、Caco-2 細胞での吸収とヒトでの吸収率との相関関係が可能になります。FaSSIF モデルを使用した Caco-2 アッセイでは、35 の化合物について異常値が 2 つだけ観察されました。これら 2 つの外れ値は、従来の Caco-2 メソッドで観察されたものと同じ外れ値化合物でした。さらに、Pgp 基質の透過性アッセイにより、両方のモデルで流出輸送が証明され、Pgp 阻害剤の添加により Pgp 流出輸送が抑制されたことが証明されました。頂端コンパートメントの FaSSIF、および側底コンパートメントの 1% BSA を含む HBSS は、親油性酸薬剤の in vivo 吸収を予測するために選択されるモデルです。

The most commonly used method to assess intestinal permeability is the measurement of compound flux across a Caco-2 cells monolayer by using Hanks balanced salt solution (HBSS)-like buffers. Nevertheless, lipophilic acid drugs are poorly or not at all soluble in these types of buffers and their adsorption on the transwell plate is commonly observed. To reduce adsorption and increase solubility, permeability assays need to be developed in conditions other than classic conditions for lipophilic compounds. The best model to increase recovery of lipophilic compounds was determined as fasted state simulated intestinal fluid (FaSSIF) in the apical compartment and HBSS with 1% bovine serum albumin (BSA) in basolateral compartment. This model allows a correlation between absorption on Caco-2 cells and absorbed fraction in humans. For 35 compounds, only 2 outliers were observed in the Caco-2 assay using the FaSSIF model. These two outliers were the same outlier compounds as those observed with a classic Caco-2 method. Furthermore, a permeability assay of Pgp substrates evidenced efflux transport in both models and addition of a Pgp inhibitor suppressed Pgp efflux transport. FaSSIF in the apical compartment and HBSS with 1% BSA in the basolateral compartment is the model of choice to predict in vivo absorption for lipophilic acid drugs.