Arthrobacter株NRRL B3728精製と特性からのD-キシロース（D-グルコース）イソメラーゼ

D-キシロース（D-グルコース）イソメラーゼは、約の収率で均一に精製されました。総可溶性タンパク質の約10％としてそれを生成するArthrobacterの株からの1 g/kgの濡れた細胞。これは、酸性残基の圧力があり、システインなしを含む同一の43,114 daサブユニットの四量体です。部分的なタンパク質配列は、遺伝子クローンのステップとして決定されました。活性にはMg2+、Co2+、またはMn2+が必要であり、Mg2+が最適です。Ca2+は阻害剤であり、Mg2+と競合します。KCATを含む優れたD-グルコースイソメラーゼです。60度CでpH 8で1200分-1。これは、このクラスの他の酵素のそれよりも高い。L-アラビノース、D-リボース、およびD-リキソースは、KCATを含む貧弱な基質です。D-キシロースの場合は533 min-1と比較して、30度CでのpH 8でそれぞれ78、31、3.7 min-1。キシリトールは、D-キシロース（KI 0.3 mM）の真の競合阻害剤ですが、D-ソルビトールは混合阻害（KI 6.5 mm）を示しています。dフルクトースの場合、60度CでのpH最適は8で、pH 7ではアレニウスの活性化エネルギーは30〜70度Cの範囲で75 kJ/molです。

D-Xylose (D-glucose) isomerase was purified to homogeneity in yields of approx. 1 g/kg of wet cells from a strain of Arthrobacter that produces it as about 10% of total soluble protein. It is a tetramer of identical 43,114 Da subunits containing a preponderance of acidic residues and no cysteine. Partial protein sequences were determined as a step to gene cloning. It requires Mg2+, Co2+ or Mn2+ for activity, Mg2+ being best; Ca2+ is an inhibitor, competitive with Mg2+. It is a good D-glucose isomerase with kcat. 1200 min-1 at pH 8 at 60 degrees C, which is higher than that of any other enzyme of this class. L-Arabinose, D-ribose and D-lyxose are poor substrates, with kcat. 78, 31 and 3.7 min-1 respectively at pH 8 at 30 degrees C, compared with 533 min-1 for D-xylose. Xylitol is a true competitive inhibitor for D-xylose (Ki 0.3 mM), but D-sorbitol shows mixed inhibition (Ki 6.5 mM). For D-fructose the pH optimum at 60 degrees C is 8, and at pH 7 the Arrhenius activation energy is 75 kJ/mol over the range 30-70 degrees C.