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アブラナ菌ナパス栽培品種Westarは、ミクロスポア胚形成の誘導のためのすべての標準プロトコルの下で非腫瘍形成です。しかし、ブラシノステロイドを添加して誘導された西部微小胞子培養で生成されたまれな胚は、染色体倍増後に遺伝的に安定した胚性株に発達することがわかった。Westar由来の2倍の半数体(DH)系統DH-2の1つは、胚の数の最大30%を生成しました。リアルタイムの逆転写PCRを使用した、Westarおよび導出されたDH-2系統の胚形成のマーカー遺伝子の発現分析により、葉の多い子葉1(LEC1)、LEC2、アブシジン酸の非感受性などの胚形成関連遺伝子のタイムリーな発現が明らかになりました3、Baby Boom1、および花粉関連の転写産物のダウンレギュレーションは、アブサ微小胞子の胚発生へのコミットメントと関連していた。B. napus種子中心のcDNAアレイ(10 642ユニゲン)を使用して、WestarおよびWestar DH-2の7日間の培養物のマイクロアレイ比較は、タンパク質合成、翻訳、および刺激(遺伝子オントロジー)への反応に関連する高度に発現した遺伝子を同定しました。胚形成DH-2ミクロスポア由来細胞培養。対照的に、花粉発現遺伝子の転写産物は、反発性の西部微小胞子で支配的でした。胚形成であることに加えて、DH-2植物は、エピナスティックな葉、吸収されていない花びら、淡い花の色、およびより長い横方向の枝など、Westarと比較して、形態と建築の変化を示しました。若い葉、成熟した葉、およびWestarとDH-2の花序のオーキシン、シトキニン、およびアブシジン酸(ABA)プロファイルは、胚性ポテンシャルまたは表現型の変化を説明できる有意差は明らかにしませんでした。Westar由来のDH系統の胚形成能力の増加を考慮したさまざまなメカニズムが考慮されます。
アブラナ菌ナパス栽培品種Westarは、ミクロスポア胚形成の誘導のためのすべての標準プロトコルの下で非腫瘍形成です。しかし、ブラシノステロイドを添加して誘導された西部微小胞子培養で生成されたまれな胚は、染色体倍増後に遺伝的に安定した胚性株に発達することがわかった。Westar由来の2倍の半数体(DH)系統DH-2の1つは、胚の数の最大30%を生成しました。リアルタイムの逆転写PCRを使用した、Westarおよび導出されたDH-2系統の胚形成のマーカー遺伝子の発現分析により、葉の多い子葉1(LEC1)、LEC2、アブシジン酸の非感受性などの胚形成関連遺伝子のタイムリーな発現が明らかになりました3、Baby Boom1、および花粉関連の転写産物のダウンレギュレーションは、アブサ微小胞子の胚発生へのコミットメントと関連していた。B. napus種子中心のcDNAアレイ(10 642ユニゲン)を使用して、WestarおよびWestar DH-2の7日間の培養物のマイクロアレイ比較は、タンパク質合成、翻訳、および刺激(遺伝子オントロジー)への反応に関連する高度に発現した遺伝子を同定しました。胚形成DH-2ミクロスポア由来細胞培養。対照的に、花粉発現遺伝子の転写産物は、反発性の西部微小胞子で支配的でした。胚形成であることに加えて、DH-2植物は、エピナスティックな葉、吸収されていない花びら、淡い花の色、およびより長い横方向の枝など、Westarと比較して、形態と建築の変化を示しました。若い葉、成熟した葉、およびWestarとDH-2の花序のオーキシン、シトキニン、およびアブシジン酸(ABA)プロファイルは、胚性ポテンシャルまたは表現型の変化を説明できる有意差は明らかにしませんでした。Westar由来のDH系統の胚形成能力の増加を考慮したさまざまなメカニズムが考慮されます。
Brassica napus cultivar Westar is non-embryogenic under all standard protocols for induction of microspore embryogenesis; however, the rare embryos produced in Westar microspore cultures, induced with added brassinosteroids, were found to develop into heritably stable embryogenic lines after chromosome doubling. One of the Westar-derived doubled haploid (DH) lines, DH-2, produced up to 30% the number of embryos as the highly embryogenic B. napus line, Topas DH4079. Expression analysis of marker genes for embryogenesis in Westar and the derived DH-2 line, using real-time reverse transcription-PCR, revealed that the timely expression of embryogenesis-related genes such as LEAFY COTYLEDON1 (LEC1), LEC2, ABSCISIC ACID INSENSITIVE3, and BABY BOOM1, and an accompanying down-regulation of pollen-related transcripts, were associated with commitment to embryo development in Brassica microspores. Microarray comparisons of 7 d cultures of Westar and Westar DH-2, using a B. napus seed-focused cDNA array (10 642 unigenes), identified highly expressed genes related to protein synthesis, translation, and response to stimulus (Gene Ontology) in the embryogenic DH-2 microspore-derived cell cultures. In contrast, transcripts for pollen-expressed genes were predominant in the recalcitrant Westar microspores. Besides being embryogenic, DH-2 plants showed alterations in morphology and architecture as compared with Westar, for example epinastic leaves, non-abscised petals, pale flower colour, and longer lateral branches. Auxin, cytokinin, and abscisic acid (ABA) profiles in young leaves, mature leaves, and inflorescences of Westar and DH-2 revealed no significant differences that could account for the alterations in embryogenic potential or phenotype. Various mechanisms accounting for the increased capacity for embryogenesis in Westar-derived DH lines are considered.
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