オイルマイクロエマルジョンおよびゼラチンマイクロエマルジョンベースのオルガルにおけるAOT水中のクロモバクテリウムviscosumリパーゼの運動学研究

速度論的研究では、油の油（エチルヘキシル）硫バーゼット（エチルヘキシル）の油（w/o）マイクロエマルジョンが非順序的（ピンポン）BI BI biメカニズムを介して発生することを速度論的研究で示しています。高濃度でのデカン酸による単一の基質阻害の証拠がありました。初期レートデータは、CAの酸とアルコールのミカエリス定数の推定値を生成しました。10（-1）mol dm（-3）および飽和条件下での最大速度。0.36 mg cm（-3）のリパーゼ濃度の場合、10（-3）mol dm（-3）s（-1）。AOTマイクロエマルジョンベースのオルガネル（MBG）に固定化されたCVリパーゼも、Ping-Pong BI BIメカニズムに従ってデカノ酸オクチルの合成を触媒することがわかりました。反応速度は、同等の条件下での遊離および固定化されたシステムで類似していた。飽和（ただし非阻害）基質濃度の初期速度は、マイクロエマルジョンとMBG/オイルシステムの両方のCVリパーゼ濃度に関して一次でした。勾配は、見かけのk（cat）= 4.4 x 10（-4）mol g（-1）s（-1）s（-1）w/oマイクロエマルジョンの場合、6.1 x 10（-4）mol g（-1）MBGに固定化されたCVリパーゼのS（-1）。MBG製剤で使用されたものに匹敵する濃度に基質とゼラチンを含むマイクロエマルジョンを含む3番目のシステムは、従来の液体マイクロエマルジョン培地と固体器官の間の有用なリンクを提供しました。これらの中間系の非依存性は、修正された準備プロトコル中の基質の初期の包含に起因します。基質の存在は、MBG形成の前提条件であると考えられている浸透微細構造の発生を妨げるように思われます。FT-NMRは、半連続的なin situアッセイ手順として採用されました。組成的に同等の液体および固相ゼラチン含有システムにおけるCVリパーゼによって発現する見かけの活性は類似していた。24 +/- 2 kJモル（-1）の見かけの活性化エネルギーは、ゼラチン含有マイクロエマルジョンのエステル化のために（1）H-NMRによって決定されました。この値は、「従来の」マイクロエマルジョンとMBG/オイルシステムの「従来の」デカノ酸オクチルのCVリパーゼ触媒合成の以前の測定と一致します。リパーゼの挙動における類似性は、主に構造測定に基づいている主張と一致しており、マイクロエマルジョンを伴うリパーゼ含有の物理化学的特性は、娘のオルガデルへの変換に大部分が保存されています。Aparrent活性化エネルギーの密接な一致は、基質の物質移動が3つの研究されたシステムで決定する速度ではないことを示唆しています。

Kinetic studies have shown that octyl decanoate synthesis by Chromobacterium viscosum (CV) lipase in sodium bis-2-(ethylhexyl) sulfosuccinate (AOT) water in oil (w/o) microemulsions occurs via the nonsequential (ping-pong) bi bi mechanism. There was evidence of single substrate inhibition by decanoic acid at high concentrations. Initial rate data yielded estimates for acid and alcohol Michaelis constants of ca. 10(-1) mol dm(-3) and a maximum rate under saturation conditions of ca. 10(-3) mol dm(-3) s(-1) for a lipase concentration of 0.36 mg cm(-3). CV lipase immobilized in AOT microemulsion-based organogels (MBGs) was also found to catalyze the synthesis of octyl decanoate according to the ping-pong bi bi mechanism. Reaction rates were similar in the free and immobilized systems under comparable conditions. Initial rates at saturating (but noninhibiting) substrate concentrations were first order with respect to CV lipase concentration in both w/o microemulsions and the MBG/oil systems. Gradients yielded an apparent k(cat) = 4.4 x 10(-4) mol g(-1) s(-1) in the case of w/o microemulsions, and 6.1 x 10(-4) mol g(-1) s(-1) for CV lipase immobilized in the MBGs. A third system comprising w/o microemulsions containing substrates and gelatin at concentrations comparable to those employed in the MBG formulations, provided a useful link between the conventional liquid microemulsion medium and the solid organogels. The nongelation of these intermediate systems stems from the early inclusion of substrate during a modified preparative protocol. The presence of substrate appears to prevent the development of a percolated microstructure that is thought to be a prerequisite for MBG formation. FT-NMR was employed as a semicontinuous in situ assay procedure. The apparent activity expressed by CV lipase in compositionally equivalent liquid and solid phase gelatin-containing systems was similar. An apparent activation energy of 24 +/- 2 kJ mol(-1) was determined by (1)H-NMR for esterification in gelatin-containing w/o microemulsions. This value agrees with previous determinations for CV lipase-catalyzed synthesis of octyl decanoate in "conventional" w/o microemulsions and MBG/oil systems. The similarities in lipase behavior are consistent with the claim, based largely on structural measurements, that the physico-chemical properties of the lipase-containing w/o microemulsion are to a large extent preserved on transformation to the daughter organogel. The close agreement of apparrent activation energies suggests that substrate mass transfer is not rate determining in the three studied systems.