培養軟骨細胞におけるプロテオグリカンとコラーゲンの合成に対するグルタチオン枯渇の影響

培養されたひよこ軟骨細胞におけるプロテオグリカンとコラーゲンの合成に対するグルタチオンの枯渇の効果を研究しました。培養軟骨細胞を1 mMブトヒオニンスルホキシミン（BSO）とインキュベートした場合、ガンマ - グルタミル - 細胞系シンテターゼの特異的阻害剤である場合、細胞内グルタチオンレベルは細胞生存率を損なうことなく12時間以内に低下しました。プロテオグリカンへの35SO2-4の組み込みは、BSOの存在下で低下しました。35S標識プロテオグリカンがグリセロール密度勾配遠心分離により2つの画分に分離された場合、プロテオグリカンの合成に対するBSOの阻害効果は、主に軟骨特異的大プロテオグナ（PG-H）で構成された高速隔離プロテオグリカン断片で大きくなりました。、ゆっくりと堆積プロテオグリカン画分よりも。P-ニトロフェニル - ベータ-D-キシロシドによってプライミングされたコアタンパク質を含まないグリコサミノグリカン鎖の合成のBSOによる阻害は、プロテオグリカンの合成の阻害よりも小さかった。[3H]グルコサミンで標識されたグリコサミノグリカンの分析により、軟骨細胞の治療がBSOで治療すると、総グリコサミノグリカンの合成に対するヒアルロン酸の合成の割合がわずかに増加することが示されました。[3H]プロリンのコラーゲンへの取り込みもBSOによって阻害されました。3H標識コラーゲンのドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動は、BSOの存在下で、II型コラーゲンの処理が減速し、X型コラーゲン合成の割合が減少したことを示しました。

We studied the effect of the depletion of glutathione on the synthesis of proteoglycan and collagen in cultured chick chondrocytes. When the cultured chondrocytes were incubated with 1 mM buthionine sulfoximine (BSO), a specific inhibitor of gamma-glutamyl-cysteine synthetase, the intracellular glutathione level markedly dropped within 12 h with no loss of cell viability. Incorporation of 35SO2-4 into proteoglycan was lowered in the presence of BSO. When the 35S-labeled proteoglycans were separated into two fractions by glycerol density gradient centrifugation, the inhibitory effect of BSO on the synthesis of proteoglycan was greater in the fast-sedimenting proteoglycan fraction, which consisted mainly of cartilage specific large proteoglycan (PG-H), than in the slowly sedimenting proteoglycan fraction. The inhibition by BSO of the synthesis of core protein-free glycosaminoglycan chains primed by p-nitrophenyl-beta-D-xyloside was smaller than the inhibition of the synthesis of proteoglycan. Analysis of glycosaminoglycans labeled with [3H]glucosamine indicated that the treatment of chondrocytes with BSO resulted in a small increase in the proportion of synthesis of hyaluronic acid to the synthesis of total glycosaminoglycan. The incorporation of [3H]proline into collagen was also inhibited by BSO. Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis of the 3H-labeled collagen showed that, in the presence of BSO, processing of Type II collagen appeared to slow down and the proportion of Type X collagen synthesis was reduced.