Bothrops Atrox Snake Venomから分離されたL-アミノ酸オキシダーゼによって誘発されるカスパーゼ媒介アポトーシスの証拠

この研究の目的は、Bothrops Atrox Snake Venomから分離されたL-アミノ酸オキシダーゼによって誘発されるアポトーシスにおけるカスパーゼの関与を調査することでした。LAAOの分離には、3つのクロマトグラフィーステップが含まれていました。G-75カラムでの分子除外。レンズ豆レクチンカラムのHPLCおよびアフィニティクロマトグラフィーによるイオン交換カラム。SDS-PAGEを使用して、予想される高純度レベルのBatroxlaaoを確認しました。「ASPおよびGlu」残基が豊富なアミノ酸組成によって確認されているように、12％糖と酸性の特性を持つ糖タンパク質です。疎水性のL-アミノ酸に対して高い特異性を示します。N末端アミノ酸配列と内部ペプチド配列は、他のヘビ毒ラオスに密接な構造相同性を示しました。この酵素はin vitro血小板凝集を誘導します。これは、カタラーゼの添加が凝集効果を完全に阻害したため、LAAOSによるH2O2産生による可能性があります。また、いくつかの癌細胞株（HL60、Jurkat、B16F10、PC12）に対する細胞毒性も示しました。細胞毒性活性はカタラーゼによって廃止されました。蛍光顕微鏡評価により、バトロクスラオ剤治療後のこれらの細胞のアポトーシス指数の有意な増加が明らかになりました。この観察は、ホスファチジルセリン曝露とカスパーゼの活性化によって確認されました。Batroxlaaoは、啓発に関与する可能性のあるさまざまな生物学的機能を備えたタンパク質です。その機能のさらなる調査は、毒物学の進歩に寄与します。

The aim of this work was to investigate the involvement of caspases in apoptosis induced by l-amino acid oxidase isolated from Bothrops atrox snake venom. The isolation of LAAO involved three chromatographic steps: molecular exclusion on a G-75 column; ion exchange column by HPLC and affinity chromatography on a Lentil Lectin column. SDS-PAGE was used to confirm the expected high purity level of BatroxLAAO. It is a glycoprotein with 12% sugar and an acidic character, as confirmed by its amino acid composition, rich in "Asp and Glu" residues. It displays high specificity toward hydrophobic l-amino acids. The N-terminal amino acid sequence and internal peptide sequences showed close structural homology to other snake venom LAAOs. This enzyme induces in vitro platelet aggregation, which may be due to H2O2 production by LAAOs, since the addition of catalase completely inhibited the aggregation effect. It also showed cytotoxicity towards several cancer cell lines: HL60, Jurkat, B16F10 and PC12. The cytotoxicity activity was abolished by catalase. A fluorescence microscopy evaluation revealed a significant increase in the apoptotic index of these cells after BatroxLAAO treatment. This observation was confirmed by phosphatidyl serine exposure and activation of caspases. BatroxLAAO is a protein with various biological functions that can be involved in envenomation. Further investigations of its function will contribute to toxicology advances.